公开(公告)号：CN116515884A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202210798778.6

申请日：2022-07-06

申请人： 河南省巴饲福微生物技术研究院 ,  郑州金大正生物科技有限公司

发明人： 陈冠珠 ,  李春艳 ,  李倩文 ,  贾培培 ,  郭灿 ,  陈占省

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N15/21 ,  C12R1/84

摘要： 本发明提供一种猪α干扰素重组基因工程菌株的构建方法，将经过密码子优化后的编码猪α干扰素的核苷酸序列构建入酵母细胞诱导表达载体中，然后转入酵母细胞进行培养后，通过层层筛选，最终获得可以产生猪α干扰素的酵母重组工程菌株。本发明设计使用的表达载体为分泌表达载体，在发酵表达后，培养得到的目的产物在细胞发酵液上清中，便于后期纯化处理。

公开(公告)号：CN116514950A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202210798787.5

申请日：2022-07-06

申请人： 郑州金大正生物科技有限公司 ,  河南省巴饲福微生物技术研究院

发明人： 李倩文 ,  李春艳 ,  陈冠珠 ,  曲卓婷 ,  付文红 ,  陈占省

IPC分类号： C07K14/56 ,  C12N15/21 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66

摘要： 本发明提供一种重组猪α‑干扰素的制备方法，重组猪α‑干扰素的制备方法包括猪α‑干扰素真核表达载体的构建、重组酵母菌的诱导表达、发酵工艺和后续提取工艺。本发明具有培养成本低、产量高以及便于产物分离纯化等优点，通过酵母表达的α‑干扰素直接以有活性的干扰素的形式分泌在发酵液的上清液中，无需复杂的变复性等后续处理工艺，并且发酵液上清中杂蛋白含量低，易进行大规模的生产。

公开(公告)号：CN115044499A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210569201.8

申请日：2022-05-24

申请人： 河南金大众生物工程有限公司 ,  河南省巴饲福微生物技术研究院

发明人： 贾培培 ,  陈冠珠 ,  郭灿 ,  张永钦 ,  申艳敏 ,  陈占省

IPC分类号： C12N1/20 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/07

摘要： 本发明提供一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法，包括以下步骤：S1)、称取1g样品于100mL带有玻璃珠的无菌生理盐水中制成初始菌悬液；S2)、初始菌悬液在恒温振荡器中充分震荡；S3)、震荡后将初始菌悬液进行梯度稀释至合适浓度，并置于80℃水浴锅中水浴10min，去除不耐热的乳酸菌、酵母菌；S4)、将混浮液涂布在显色培养基平皿上，倒置于40‑45℃恒温培箱内培养一段时间后观察菌落形态；S5)、24h后有黄色晕圈的菌落即为凝结芽孢杆菌。本发明针对凝结芽孢杆菌既能产芽孢，抗逆性强，又能产酸，生长缓慢的特点，从而快速准确的筛选鉴定出凝结芽孢杆菌。

公开(公告)号：CN116515883A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202210797758.7

申请日：2022-07-06

申请人： 郑州金大正生物科技有限公司 ,  河南省巴饲福微生物技术研究院

发明人： 陈冠珠 ,  李春艳 ,  李倩文 ,  曲卓婷 ,  申艳敏 ,  付文红 ,  陈占省

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N15/16 ,  C07K14/60

摘要： 本发明提供一种促生长肽的合成方法，其特征在于，包括：S1)、构建重组猪生长肽的克隆载体；S2)、将线性化产物导入表达宿主菌，S3)、高拷贝重组酵母菌的诱导表达S4)、高表达菌株的复筛。本发明通过RT‑PCR和PCR方法获得猪prepro Ghrelin的cDNA序列，通过酵母偏嗜性的密码子优化，重组菌株可以获得较高的表达量；获得密码子优化后的猪prepro Ghrelin核苷酸序列，构建入酵母细胞诱导表达载体中，然后转入酵母细胞进行培养后，通过层层筛选，最终获得可以产生pGhrelin的酵母重组工程菌株；培养得到的目的产物在细胞发酵液上清中，目的蛋白的含量在总蛋白中占比，便于后期纯化处理。

公开(公告)号：CN115747089A

公开(公告)日：2023-03-07

申请号：CN202210798770.X

申请日：2022-07-06

申请人： 河南省巴饲福微生物技术研究院 ,  郑州金大正生物科技有限公司

发明人： 李春艳 ,  陈冠珠 ,  李倩文 ,  曲卓婷 ,  陈占省

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N15/52 ,  C12N15/81 ,  C07K5/037 ,  C12P21/02 ,  C12R1/865

摘要： 本发明涉及一种生产谷胱甘肽的重组酿酒酵母菌及其构建方法，该重组酿酒酵母菌过表达γ‑谷氨酰半胱氨酸合成酶的基因和/或谷胱甘肽合成酶的基因。利用该重组酿酒酵母菌生产谷胱甘肽，具有产量高、得率高、生物安全、使用无毒副作用等优点。该菌属于食品安全微生物范畴，其表达产物不需要经过大量宿主安全性实验，即可用于生产符合食品级要求的谷胱甘肽，符合节约资源、环境友好的理念。

公开(公告)号：CN116514949A

公开(公告)日：2023-08-01

申请号：CN202210797756.8

申请日：2022-07-06

申请人： 郑州金大正生物科技有限公司 ,  河南省巴饲福微生物技术研究院

发明人： 李春艳 ,  陈冠珠 ,  李倩文 ,  曲卓婷 ,  申艳敏 ,  付文红 ,  陈占省

IPC分类号： C07K14/56 ,  C07K1/36 ,  C07K1/34 ,  C07K1/30 ,  C12N15/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66

摘要： 本发明提供一种原核表达的重组猪α干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)、猪α‑干扰素基因poIFN‑α的优化；S2)、将猪α干扰素基因连接至原核表达载体pET‑28a上，以构建猪α‑干扰素基因poIFN‑α的原核重组表达质粒pET‑28a‑IFN‑α，S3)、将表达载体转化大肠杆菌，获得基因工程菌，基因工程菌用IPTG诱导，以实现诱导重组质粒pET‑28a‑IFN‑α原核表达；S4)、重组猪α干扰素包涵体的制备；S5)、重组猪α干扰素包涵体的溶解和复性。采用本发明方法制备的重组猪α干扰素纯度高、活性强、半衰期长。