公开(公告)号：CN119193659A

公开(公告)日：2024-12-27

申请号：CN202410682948.3

申请日：2024-05-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  谷朋 ,  乔鑫 ,  王利斌 ,  李岚清 ,  张旭 ,  贾璐婷 ,  谢智华 ,  张琛 ,  齐开杰 ,  马敏 ,  孙莉琼 ,  钱铭

IPC: C12N15/82 ,  C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N1/21 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  A01H6/82 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了梨转录因子Pbr3AP2‑8和基因PbrC3'H1在调控梨果实绿原酸积累中的应用。梨AP2/ERF家族转录因子Pbr3AP2‑8的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过分析PbrC3'H1启动子中顺式作用元件的分布，以及采后贮藏和乙烯/1‑MCP处理后PbrERFs的表达谱，首次揭示了调控梨果实PbrC3'H1基因表达的转录因子Pbr3AP2‑8。阐明了Pbr3AP2‑8与PbrC3'H1基因启动子中的AP2结合位点(P：(‑466)‑(‑457))互作在调控梨果实绿原酸合成的作用机制，为实现采后梨果实品质性状的定向改良提供了理论及实践基础。

公开(公告)号：CN119162230A

公开(公告)日：2024-12-20

申请号：CN202411401158.X

申请日：2024-10-09

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  王利斌 ,  谭筱玉 ,  张旭 ,  李岚清 ,  齐开杰 ,  姜丽 ,  牛军鹏 ,  谢玉花 ,  乔鑫 ,  李雪晖 ,  谢智华 ,  王亚茹 ,  武张飞 ,  贾璐婷 ,  张琛

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PbrWRKY83与PbrDHAR5基因在增强果实抗低温胁迫能力中的应用。梨WRKY家族转录因子PbrWRKY83的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示，所属基因编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明首次揭示了调控梨果实PbrDHAR5基因表达的转录因子PbrWRKY83。本发明阐明了PbrWRKY83与PbrDHAR5基因启动子中的W‑box元件(P1：(‑453)‑(‑488)；P2：(‑1233)‑(‑1228))互作在调控梨AsA氧化还原状态进而增强果实抗低温胁迫能力的作用机制，为培育抗虎皮病的优质梨品种提供了理论及实践基础。

公开(公告)号：CN118910323A

公开(公告)日：2024-11-08

申请号：CN202411334794.5

申请日：2024-09-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  谷超 ,  郭志华 ,  齐开杰 ,  谢智华 ,  张正茂

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11 ,  A01H1/04

Abstract: 本发明公开了一种与梨果实早熟相关的分子标记及其应用，属于分子标记和生物育种领域。本发明筛选了的SNP位点FM_22516479位于梨基因组的6号染色体上的第22516479个碱基处，所述SNP位点FM_22516479的多态性为G或T，晚熟的杂交后代果实中SNP位点FM_22516479为G，早熟的杂交后代果实中为T。利用本发明开发的SNP位点FM_22516479设计特异性引物，采用高分辨率熔解曲线的方法对梨果实的成熟期进行良好的分型。可用于梨果实早熟品种的分子标记辅助选择育种，有利于加快梨品种的遗传改良进程，提高育种选择率。

公开(公告)号：CN118256480A

公开(公告)日：2024-06-28

申请号：CN202410497968.3

申请日：2024-04-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  陈杨杨 ,  殷豪 ,  吴潇 ,  谢智华 ,  吴瑶

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/82 ,  C12N15/60 ,  C12N15/11 ,  A01H5/00 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  A01H6/82

Abstract: 本发明公开了梨氧化烯合酶AOS1和AOS2及其编码基因在植物中的应用，属于植物分子基因工程技术领域，本发明从梨中分离得到编码PuAOS1和PuAOS2基因的完整cDNA，连接到植物表达载体上，利用农杆菌介导转化植物，通过烟草瞬时表达证明PuAOS1定位于植物细胞核和细胞膜，PuAOS2定位于植物细胞膜；利用农杆菌注射获得瞬时转化梨果实，分别利用叶盘转化法和组织侵染法获得转基因番茄和转基因梨愈伤，结果表明过表达PuAOS1和PuAOS2能够促进植物中挥发性C6化合物的合成。本发明为PuAOS1和PuAOS2促进植物挥发性C6化合物合成的研究提供了研究基础和基因资源。

公开(公告)号：CN117362405A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202311309118.8

申请日：2023-10-11

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  林立锟 ,  黄小三 ,  袁凯莉 ,  邢才华 ,  乔清海 ,  董彗珍 ,  陈启明 ,  张凤 ,  谢智华 ,  齐开杰 ,  王亚茹

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明提供了一种影响植物对炭疽病敏感性的水杨酸通路基因PbNPR3、蛋白及其应用，属于功能基因技术领域。一种影响植物对炭疽病敏感性的水杨酸通路基因PbNPR3，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明将所述基因PbNPR3转入到植物中，基因PbNPR3过量表达，所转基因植物与野生愈伤组织相比对炭疽病较为敏感；而将该基因沉默，所得转基因植物与野生株相比能有效增强转基因植株的抗炭疽病能力。因此，本发明提供的水杨酸通路基因PbNPR3为培育抗炭疽病植物新品种以及提高植物对炭疽菌耐受性具有重要意义。

公开(公告)号：CN115896045A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202210825925.4

申请日：2022-07-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  黄小三 ,  林立锟 ,  刑才华 ,  袁凯莉 ,  乔清海 ,  谢智华 ,  齐开杰

IPC: C12N9/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种杜梨E3泛素连接酶基因PbrATL18在植物抗干旱和炭疽病遗传改良中的应用，属于基因工程技术领域。PbrATL18基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，通过在植物中超表达所述PbrATL18基因或提高所述蛋白活力，以提高植物抗干旱和/或炭疽病性能。本发明通过分别构建基因超表达拟南芥转化载体和基因沉默杜梨幼苗转化载体，获得阳性植株苗进行干旱和炭疽病处理，结果发现过表达E3泛素连接酶基因PbrATL18能够有效维持细胞内活性氧的平衡，保持细胞渗透势稳定，可显著提高植物抗旱和抗炭疽病性能，为梨树的高耐旱抗病育种提供新的思路。

公开(公告)号：CN112794887B

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN202110016563.X

申请日：2021-01-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  黄小三 ,  林立锟 ,  黄咏丹 ,  董慧珍 ,  谢智华 ,  齐开杰 ,  王亚茹

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/11 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明提供了杜梨转录因子PbrWRKY40及其在提高植物总酸含量和抗盐遗传改良中的应用，属于基因工程技术领域。含PbrWRKY40编码基因的拟南芥转化植株的抗盐能力显著高于野生型植株，体内总酸含量也显著高于野生型；另外阳性植株钠离子含量、电导率、过氧化氢含量和超氧阴离子含量均低于野生型拟南芥。将杜梨幼苗体内的PbrWRKY40转录因子沉默后，野生型杜梨幼苗的抗盐能力优于沉默的杜梨幼苗，表明PbrWRKY40转录因子的沉默使杜梨幼苗的抗盐性减弱，体内总酸含量降低。因此，本发明提供了杜梨转录因子PbrWRKY40在提高植物总酸含量和抗盐遗传改良中的应用。

公开(公告)号：CN113789343A

公开(公告)日：2021-12-14

申请号：CN202110904455.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴巨友 ,  张皓 ,  刘雪莹 ,  曹鹏 ,  张明亮 ,  王鹏 ,  张绍铃 ,  谢智华 ,  齐开杰

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/66 ,  C12N15/56 ,  C12N15/29 ,  A01H5/12 ,  A01H6/82 ,  C12Q1/34 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种体内检测ROP蛋白活性的方法，包括(1)构建融合蛋白表达载体并转化农杆菌感受态细胞；(2)植物叶片注射；(3)植物活体成像仪定性检测荧光强度；(4)酶标仪定量检测荧光素酶活性：使用酶标仪进行荧光扫描，以显示荧火素酶分解底物后产生荧光的强度来判断荧光素酶活性的强弱，从而检测目标蛋白AtROP1的活性强弱的程度。该方法基于RIC1作为ROP蛋白的下游效应子能特异地与活性形式的ROP结合这一特点，通过荧火素酶互补实验，借助烟草瞬时表达系统，利用植物活体成像仪和酶标仪进行定性定量检测荧光强度，从而实现体内检测ROP蛋白的活性。同时该方法还具有高灵敏度、可视化、可定量化和操作简单高效等特点。

公开(公告)号：CN111690046B

公开(公告)日：2021-10-26

申请号：CN202010632107.3

申请日：2020-07-03

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  谷超 ,  曹苏豪 ,  谢智华 ,  齐开杰

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/11 ,  C12N15/84 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PbHB.G7.2及其在促进果实成熟中的应用，属于植物基因工程技术领域，提供了一种如SEQ ID No.1所示的具有促进果实乙烯的合成，加速果实成熟过程功能的转录因子PbHB.G7.2基因。将所述梨转录因子PbHB.G7.2瞬时转化到梨果实中获得的超表达系梨果实的乙烯释放量明显高于对照系，成熟过程也加快，经生物学功能验证，表明转录因子PbHB.G7.2能够结合并激活PbACS1b启动子，提高PbACS1b基因表达水平，具有提高梨果实乙烯合成量，能够促进梨果实成熟的功能。为促进梨果实成熟的分子育种提供新的基因资源，该遗传资源的开发有利于增加农民收入和降低农业成本。

公开(公告)号：CN112067724B

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202010985806.6

申请日：2020-09-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张绍铃 ,  樊进补 ,  谢智华 ,  黄小三 ,  殷豪 ,  吴静贻 ,  蒙小玉 ,  张苏玲 ,  王利斌 ,  齐开杰

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/74 ,  G01N30/78 ,  G01N30/88 ,  G01N30/34 ,  G01N30/14

Abstract: 本发明提供了一种梨果实中可溶性糖酸的定性检测方法，属于有机检测技术领域。本发明中可溶性糖酸的测定采用超高效液相色谱检测(UPLC)，本发明通过精确限定了超高效液相色谱检测的条件，实现了可溶性糖和有机酸的定性检测，且该方法中可溶性糖的测定可控制在14min内出峰完全，有机酸的测定可控制在5min内出峰完全，比目前常规的高效液相色谱法(HPLC)(可溶性糖在20min出峰，有机酸在15min出峰)更节约时间，自动化程度高、重复性好，可推广到今后果实糖酸含量及组分的研究中，能够实现梨果实中糖酸含量大批量检测。