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    一种能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a及其定点突变方法与应用
    71.
    发明公开
    一种能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a及其定点突变方法与应用 有权

    公开(公告)号：CN110194792A

    公开(公告)日：2019-09-03

    申请号：CN201910627648.4

    申请日：2019-07-12

    申请人： 云南省烟草农业科学研究院

    发明人： 姚恒 ,  杨大海 ,  谢贺 ,  白戈 ,  童治军 ,  张谊寒 ,  陈学军 ,  肖炳光 ,  李永平

    IPC分类号： C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

    摘要： 本发明公开了一种能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a及其定点突变方法与应用。所述的能提高烟草抗旱的转录因子NtMYB44a的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；采用CRISPR/Cas9技术，设计了2个sgRNA靶位点，分别位于距离终止密码子（TGA）236bp和230bp，通过转化烟草造成该基因在目标位点的突变；通过自交收种后，筛选得到了NtMYB44a基因定点纯合突变后代。生理实验表明突变烟草叶片失水速率显著慢于野生型的对照植株。干旱胁迫后的覆水实验表明突变植株存活率显著高于野生型植株。本发明表明利用CRISPR/Cas9技术针对NtMYB44a基因尾部（即距离NtMYB44a翻译终止密码子（TGA）200bp至300bp序列范围）所创制出的NtMYB44a基因纯合突变烟草材料比野生型烟草具有更高的抗旱能力。本发明为NtMYB44a基因及其编码蛋白应用于烟草抗旱育种提供基因资源与技术支持。

    一种蛋白在烟草耐旱性检测中的应用
    75.
    发明授权
    一种蛋白在烟草耐旱性检测中的应用 有权

    公开(公告)号：CN105301092B

    公开(公告)日：2017-12-22

    申请号：CN201510878638.X

    申请日：2015-12-04

    申请人： 云南省烟草农业科学研究院

    发明人： 白戈 ,  姚恒 ,  谢贺 ,  杨大海 ,  童治军 ,  陈学军

    IPC分类号： G01N27/62

    摘要： 本发明公开了一种蛋白在烟草耐旱性检测中的应用，即通过测定作为烟草耐旱性标记物的所述蛋白的差异表达来判断烟草的耐旱性。所述蛋白为histone H4 isoform X1型组蛋白，氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；所述蛋白为heat shock protein 82蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。本发明能够可靠、灵敏地检测烟草耐旱性，为筛选烟草耐旱性品种以及辅助传统杂交育种提供一条全新的途径，适于大规模推广应用。

    一种拟南芥基因RNB的应用
    77.
    发明公开
    一种拟南芥基因RNB的应用 有权

    公开(公告)号：CN105039395A

    公开(公告)日：2015-11-11

    申请号：CN201510580859.9

    申请日：2015-09-14

    申请人： 云南省烟草农业科学研究院

    发明人： 白戈 ,  姚恒 ,  杨大海 ,  谢贺

    IPC分类号： C12N15/82 ,  A01H5/00

    摘要： 本发明公开了一种拟南芥基因RNB的应用，所述的拟南芥基因RNB在改变植物RNA的剪切中的应用。本发明通过筛选拟南芥突变体，筛选得到了对低温胁迫敏感的拟南芥突变体rnb，分离得到了 RNB基因；实验表明：拟南芥RNB基因参与拟南芥叶绿体的合成，通过影响叶绿体内RNA的转录及剪切，调节提高植物的抗低温胁迫反应。RNB基因的功能分析和鉴定为获得抗低温胁迫植物新品种提供了理论和方法的基础。

    一种离心法测定花粉与柱头粘附力的方法
    78.
    发明授权
    一种离心法测定花粉与柱头粘附力的方法 有权

    公开(公告)号：CN102879328B

    公开(公告)日：2014-07-23

    申请号：CN201210398538.3

    申请日：2012-10-17

    申请人： 云南省烟草农业科学研究院 ,  玉溪中烟种子有限责任公司

    发明人： 姚恒 ,  马文广 ,  郑昀晔 ,  牛永志 ,  索文龙 ,  宋碧清 ,  李元君

    IPC分类号： G01N19/04

    摘要： 本发明公开了一种离心法测定花粉与柱头粘附力的方法，包括花粉密度测定、离心液配制、授粉柱头固定、差速离心洗脱、荧光显微镜观察、粘附力计算等步骤。首先用密度梯度离心法测定花粉密度，其次配置质量百分比为70%的蔗糖溶液作为离心液，然后将待测的授粉柱头固定在离心管底部，在4~30℃下，将经质量百分比0.01~1%的水溶性苯丙胺蓝染色的授粉柱头，在离心机中洗脱5~20min，显微镜下观察待测授粉柱头上花粉被洗脱时的离心加速度，根据下列公式计算花粉与柱头间的粘附力：本发明可用于各种花粉与柱头粘附力的测量，测量精度高，重复性好，简便易行。

    一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法
    79.
    发明公开
    一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法 有权

    公开(公告)号：CN102890040A

    公开(公告)日：2013-01-23

    申请号：CN201210394118.8

    申请日：2012-10-17

    申请人： 云南省烟草农业科学研究院 ,  玉溪中烟种子有限责任公司

    发明人： 马文广 ,  姚恒 ,  牛永志 ,  郑昀晔 ,  索文龙 ,  宋碧清 ,  李元君

    IPC分类号： G01N9/24

    摘要： 本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20℃下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：本发明适用于各种花粉密度的测定，结果准确，重复性好，操作简便、易行，需样品量少。