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公开(公告)号：CN110551634A
公开(公告)日：2019-12-10
申请号：CN201910833143.3
申请日：2019-09-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供一种山羊支原体山羊肺炎亚种分离培养方法，包括以下步骤：(1)病料样品处理，得到处理好的样品液；(2)样品接种：将处理好的样品液或用无菌的0.01MpH7.2PBS稀释得到的稀释后的样品液接种7-8日龄健康SPF鸡胚，接种后，将SPF鸡胚置于孵化箱继续孵育，孵化箱温度37.0～37.5℃，湿度50％；(3)收获：观察鸡胚的存活情况，将接种后死亡鸡胚置4℃保存12-24h，收集鸡胚尿囊液。本发明方法可方便、快速的用于山羊支原体山羊肺炎亚种的分离培养，可方便快速获得不含动物血清的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原，可克服血清使用带来的诸多问题。
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公开(公告)号：CN106635865B
公开(公告)日：2019-08-13
申请号：CN201610689925.0
申请日：2016-08-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤10.5 g、脑心浸出液8.0 g、氯化钠4.0 g、硫酸镁0.05 g、氯化钾0.2 g、氯化钙0.09 g、磷酸氢二钠0.024 g、磷酸二氢钾0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法及应用。本发明的有益效果为：本发明提供的一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用，与现有技术相比，具有生长迅速和滴度高的特点，分离出牛鼻支原体的成功率高。
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公开(公告)号：CN106399206B
公开(公告)日：2019-08-13
申请号：CN201611072161.7
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种牛支原体培养基及其制备方法。本发明的牛支原体培养基由基础培养基和辅助培养基混合构成，其中培养基的组成为：Friis media premix、丙酮酸钠、新鲜酵母浸出液、葡萄糖、酚红、去离子水、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、转铁蛋白、胰岛素、青霉素和少量马血清。本发明既能减少血清用量，还明显提高了牛支原体的活菌滴度，为牛支原体优质疫苗的研制奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106635895B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201611071308.0
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体低血清高效培养基，含有以下组分：MEM、丙酮酸钠、葡萄糖、Hank’s液、新鲜酵母浸出液、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、小牛胸腺DNA、胰岛素、转铁蛋白、青霉素、马血清、酚红、去离子水；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的绵羊肺炎支原体培养基血清含量仅为5%，是现有技术培养基血清含量的1/4；用本发明方法制备的绵羊肺炎支原体半成品菌液滴度达1010 CCU/ml，明显高于现有技术培养基。低血清高效培养基培养绵羊肺炎支原体，既减轻了异源血清对羊体的过敏应激反应，提高了生物安全，也提高了活菌菌液滴度，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN106222109B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610690169.3
申请日：2016-08-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于殊异支原体分离培养的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤8.5g、脑心浸出液8.5g、葡萄糖2.0g、Hank’s平衡盐溶液500 ml、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的殊异支原体培养基与现有技术相比，活菌滴度可达1010 CCU/ml，而现有技术培养基生长滴度为107‑109 CCU/ml；继代培养殊异支原体，本发明培养基2‑3天可传代一次，而现有技术传代一次一般需要3‑5天，充分说明本发明提供的培养基具有生长快速、培养滴度高的特点，适用于殊异支原体的分离培养。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107099608A
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201710443863.X
申请日：2017-06-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司 , 北京华安瑞基生物科技有限公司
CPC classification number: C12Q1/689 , C12Q2600/166
Abstract: 本发明公开了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，它属于分子生物学检测领域。所述试剂盒包括：Premix Ex Taq引物Mccp‑specific‑Forward和Mccp‑specific‑Revers，探针Mccp‑specific‑Probe，阴性对照和阳性对照。本发明将检测结果同之前建立的山羊支原体山羊肺炎亚种实时荧光定量PCR检测结果进行比较，发现两种方法的符合率为100％。同时，本发明也对试剂盒的稳定性进行了检测，发现在‑20℃条件下，试剂盒至少可以保存一个月，这为山羊支原体山羊肺炎亚种的现场检测提供了极大的便利，省去了现场操作带来的交叉污染以及费时费力等问题。
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公开(公告)号：CN107083441A
公开(公告)日：2017-08-22
申请号：CN201710444371.2
申请日：2017-06-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/689 , C12Q1/686 , C12Q2600/156 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2545/114 , C12Q2561/101
Abstract: 本发明公开了检测山羊支原体山羊肺炎亚种的荧光定量PCR试剂盒，它属于分子生物学检测领域。PCR试剂盒包含引物和探针,引物为：Mccp‑specific‑Forward：5′‑GTAGCAGCTATATTCTTAATCA‑3′，Mccp‑specific‑Reverse：5′‑GCTACAAATAATTCTTGCATAC‑3′，探针为：Mccp‑specific‑Probe：5′‑F‑AAGTAATACCAGCAGCAACAGCAAG‑Q‑3′，F为荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团，探针5′端标记有荧光报告基团FAM，3′端标记有荧光淬灭基团TAMRA。试剂盒检测结果重复性较好，检测方法稳定，数据可靠。
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公开(公告)号：CN106591177A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611070622.7
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种低血清高效培养基，含有以下组分：PPLO肉汤、丙酮酸钠、乳糖、胰蛋白胨、新鲜酵母浸出液、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、马血清、青霉素、酚红、去离子水；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的山羊支原体山羊肺炎亚种培养基血清含量仅为5%，仅为现有技术培养基血清量的1/5～1/4；此外，用本发明方法制备的半成品菌液滴度达1010 CCU/ml，明显高于现有技术培养基。本发明低血清高效培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，既有利于减轻异源血清对羊体的过敏应激反应，提高生物安全，又提高了活菌滴度，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN106399207A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201611072162.1
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种牛支原体培养基及其制备方法，属于兽医生物技术领域。本发明的牛支原体培养基由基础培养基和辅助培养基混合构成，其中培养基的组成为：PPLO肉汤、丙酮酸钠、葡萄糖、新鲜酵母浸出液、L-谷氨酰胺、L-半胱氨酸、水解乳蛋白、马血清、青霉素、酚红、去离子水。本发明既能减少血清用量，还明显提高了牛支原体的活菌滴度，为牛支原体优质疫苗的研制奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106350472A
公开(公告)日：2017-01-25
申请号：CN201611072164.0
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种牛支原体液体培养基及其制备方法，涉及兽医生物技术领域。本发明的牛支原体液体培养基由基础培养基和辅助培养基混合构成，培养基的组成为：蛋白胨、葡萄糖、丙酮酸钠、新鲜酵母浸出液、L-谷氨酰胺、L-半胱氨酸、水解乳蛋白、转铁蛋白、胰岛素、少量马血清、青霉素、酚红、去离子水。本发明的牛支原体培养基有利于牛支原体的生长，活菌滴度达1010CCU/ml，明显高于现有技术培养基。此外，本发明培养基中血清含量仅为5%，为现有技术培养基血清含量的1/4～1/2。与现有技术相比，本发明培养基具有血清含量低、生长迅速和活菌滴度高的特点。
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