一种大黄鱼TGF-β1重组蛋白及其应用

    公开(公告)号:CN114213522A

    公开(公告)日:2022-03-22

    申请号:CN202111632000.X

    申请日:2021-12-29

    Abstract: 本发明提供了一种大黄鱼转化生长因子‑β1重组蛋白及其应用,属于基因工程技术领域。该重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。本发明构建了高效表达大黄鱼TGF‑β1重组蛋白的大肠杆菌工程菌,利用该大肠杆菌工程菌产生的大黄鱼TGF‑β1重组蛋白,可抑制大黄鱼头肾巨噬细胞中炎症相关因子iNOS和TNFα的表达水平,并抑制巨噬细胞中炎症相关活性物质活性氧和一氧化氮的产生,降低大黄鱼的炎症反应,在作为消除炎症蛋白制剂中具有良好的应用前景。

    一种大黄鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法

    公开(公告)号:CN112779258A

    公开(公告)日:2021-05-11

    申请号:CN202110227210.4

    申请日:2021-03-02

    Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法,所述方法包括以下步骤:利用体外转录合成Cas9 mRNA和靶基因sgRNA,将它们与酚红混合,Cas9 mRNA和靶基因sgRNA的终浓度分别为1000 ng/μL和120 ng/μL,再利用显微注射的方式,将混合物导入卵膜变硬之前的大黄鱼受精卵中;孵化48 h后,检测并获得相应的基因突变体。本发明首次成功建立了大黄鱼基因编辑的方法,不仅可用于大黄鱼基因功能的研究,还为大黄鱼遗传改良育种开辟新的途径。

    一种大黄鱼虹彩病毒的TaqMan探针法荧光定量PCR检测试剂盒及制备方法

    公开(公告)号:CN111979355A

    公开(公告)日:2020-11-24

    申请号:CN202010898385.3

    申请日:2020-08-31

    Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼虹彩病毒的TaqMan探针法荧光定量PCR检测试剂盒及制备方法,本发明以大黄鱼虹彩病毒LYCIV中的Laminin-like保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物及对应的TaqMan探针,建立了LYCIV TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒,本发明引物和探针的序列如下:正向引物F:5’-CGCTTGACCAAACAATCTTC-3’;反向引物R:5’-ATGAGCAATGGCGACCC-3’;荧光探针Q:5’-6-FAM–CTTCTTCTGTTGCTGACTGTGGCGTGTACTC-BHQ1-3’。

    大黄鱼IFNc基因大肠杆菌表达产物的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109517775A

    公开(公告)日:2019-03-26

    申请号:CN201811362411.X

    申请日:2018-11-15

    Abstract: 本发明涉及一种大黄鱼IFNc基因大肠杆菌表达产物的制备方法与应用,本发明通过分子生物学手段,将大黄鱼干扰素c(IFNc基因)克隆后连接至大肠杆菌表达载体中,通过转化,诱导表达,获得重组表达产物,具体包括以下步骤:基因克隆、重组表达载体的构建、转化入大肠杆菌、IPTG诱导及表达产物的纯化等步骤。所获得的表达产物可诱导大黄鱼外周血白细胞表达抗病毒蛋白基因如Mx1、PKR和ISG15。

    抗大黄鱼IgM单克隆抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN109400706A

    公开(公告)日:2019-03-01

    申请号:CN201811360852.6

    申请日:2018-11-15

    Inventor: 陈新华 黄宇鹏

    Abstract: 抗大黄鱼IgM单克隆抗体及其制备方法。抗大黄鱼IgM单克隆抗体为杂交瘤细胞株IgM-9G7。制备大黄鱼IgM抗原;制备杂交瘤细胞株IgM-9G7;制备抗大黄鱼IgM的单克隆抗体。大黄鱼IgM单克隆抗体是由杂交瘤细胞株IgM-9G7产生、对大黄鱼IgM具有特异性的抗体。该细胞分泌的免疫球蛋白能够高效特异性结合大黄鱼IgM,最高效价达到2×104。将纯化的大黄鱼IgM免疫动物,取其产生抗大黄鱼IgM单克隆抗体的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,该细胞株能分泌抗大黄鱼IgM的单克隆抗体。此抗体特异性高,灵敏度高,可用于大黄鱼IgM的结构分析、免疫应答水平检测等。

    大黄鱼SOCS3基因启动子序列及其应用

    公开(公告)号:CN120041453A

    公开(公告)日:2025-05-27

    申请号:CN202510206474.X

    申请日:2025-02-25

    Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼SOCS3基因的启动子序列,如SEQ ID NO.1所示。将重组质粒pGL3‑SOCS3转染鲤上皮瘤(EPC)细胞,以海肾荧光素酶为内参,其萤火虫荧光素酶活性最高可达对照组的4.2倍,说明大黄鱼SOCS3启动子启动了下游报告基因的转录表达,具有启动子基础活性。将重组质粒pGL3‑SOCS3和pRL‑TK共转染EPC细胞,再加入poly(I:C),结果显示,Poly(I:C)可显著增强大黄鱼SOCS3启动子的活性,和对照组相比最高上升了1.7倍,说明大黄鱼SOCS3启动子可以响应外源的免疫刺激。本发明为研究大黄鱼 SOCS3 基因的转录调控机制提供优良的实验系统,也可用于高效表达外源基因或应用于转基因大黄鱼的研究,具有理论意义和实践价值。

    大黄鱼白细胞介素22重组蛋白及其应用

    公开(公告)号:CN120040578A

    公开(公告)日:2025-05-27

    申请号:CN202510206915.6

    申请日:2025-02-25

    Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼IL‑22重组蛋白,所述重组蛋白为大黄鱼IL‑22成熟肽序列,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过PCR扩增编码大黄鱼IL‑22成熟肽第31~190位氨基酸的基因片段,转化大肠杆菌进行异源表达,获得重组蛋白。本发明大黄鱼IL‑22重组蛋白可激活大黄鱼头肾细胞系(LYCK)中转录因子STAT3,此外,还可诱导大黄鱼免疫器官中炎症因子(IL‑1β、IL‑6和IL‑8)的表达,表明大黄鱼IL‑22重组蛋白具有明显的免疫调节作用,显示出其在水产免疫调节剂研发中的良好应用前景。

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