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公开(公告)号：CN115074389A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210661981.9
申请日：2022-06-13
Applicant: 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/867 , C12N15/11 , C12N15/66 , C12N15/40 , C12N5/10 , C12Q1/70 , G01N33/569 , G01N33/58 , C12R1/91 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的细胞系的构建方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该构建方法包括：(1)采用构建重组质粒；(2)采用所述重组质粒转染细胞，得到重组细胞；(3)将重组细胞和慢病毒包装质粒共同培养，得到慢病毒样颗粒的培养液；(4)将慢病毒样颗粒的培养液感染宿主细胞，筛选得到稳定株，培养后获得细胞系。实施本发明，可稳定提升NS1mRNA和蛋白的表达水平。
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公开(公告)号：CN115011562A
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202210451385.8
申请日：2022-04-24
Applicant: 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学
Abstract: 本发明公开一种鸡新城疫禽流感二联疫苗的制备方法，其包括：(1)提供MDCK悬浮细胞，并培养传代；(2)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～5mg/L的地塞米松和2～8mg/L依达拉奉，得到鸡新城疫培养基；将鸡新城疫病毒接种至所述鸡新城疫培养基，培养得到新城疫病毒液；(3)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～6g/L的超滤过的酶消化产物，得到禽流感培养基；将禽流感病毒接种至所述禽流感培养基，培养得到禽流感病毒液；(4)将所述新城疫病毒液、禽流感病毒液灭活，并与辅料混合，得到鸡新城疫禽流感二联疫苗。本发明的制备方法简化了病毒繁殖培养工艺，提高了病毒滴度，进而得到的抗体效价高，攻毒保护效果好。
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公开(公告)号：CN114807061A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202111582307.3
申请日：2021-12-22
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株的构建方法，其包括：(1)获取IBV‑Beaudette病毒基因组全长cDNA重组质粒；(2)构建A21963G沉默突变和G22170C沉默突变的IBV‑Beaudette病毒全长cDNA重组质粒；(3)转染细胞，拯救获得的病毒即为鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株。相应的，本发明还公开了一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株及疫苗。实施本发明，可得到具有Vero细胞适应性的A21963G和G22170C双位点沉默点突变的基因标记毒株，为IBV基因标记疫苗的研制提供参考。
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公开(公告)号：CN114276420A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111261717.8
申请日：2021-10-28
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种可溶性VP2抗原，所述VP2抗原通过将VP2基因克隆到pColldⅢ载体上构成表达质粒pColldⅢ‑VP2，转化进入BL21(DE3)感受态细胞(pTf16分子伴侣)，得到基因工程菌种Escherichia coli pTf16/BL21/pColldⅢ‑VP2，提取得到可溶性VP2抗原；所述VP2基因的核苷酸序列如核苷酸序列NO.1所示。该抗原具有优异的免疫保护率，该效果和蛋白本身的可溶性以及空间结构密切相关；同时，本发明还提供了一种疫苗、抗原的制备方法。
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公开(公告)号：CN113817764A
公开(公告)日：2021-12-21
申请号：CN202111261808.1
申请日：2021-10-28
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/66 , C12N15/34 , C07K14/075 , C12N1/21 , C07K1/22 , A61K39/235 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种I群4型禽腺病毒Fiber‑2蛋白的制备及应用。所述制备方法包括：以FAdV‑4毒株DNA为模板，设计引物扩增出fiber2序列，测序正确后，将fiber2序列进行密码子优化，然后将其构建到pMal‑c2X载体上，得到重组质粒pMal‑c2X‑FAV4‑fiber2；最后转化大肠杆菌BL21进行诱导表达，得到I群4型禽腺病毒Fiber‑2蛋白。本发明方法只需要在37℃诱导3h即可，时间短，操作简单，其表达的目的蛋白是有利于纯化的可溶性蛋白，只需要一步镍柱层析，便可获得大量目的蛋白，而且成本低，易放大。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108531462B
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201810359474.3
申请日：2018-04-20
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
Abstract: 本发明公开了一种禽腺病毒精纯化的方法，包括步骤如下：1.取在细胞瓶中培养的鸡胚细胞，进行病毒接种，并加入DMEM培养基，将细胞瓶置于37℃转瓶培养箱中继续培养，接毒后，收获瓶内所有的病毒细胞培养液，经离心后收集上清液；2.使用超滤膜包对步骤1所获得的上清液进行10‑40倍浓缩；3.通过G200分子筛层析填料对步骤2所得液体进行分子筛层析；4.使用超滤膜包对步骤3回收的病毒液进行3‑10倍浓缩；5.使用阴离子交换层柱对步骤4所得病毒液进行层析纯化；6.使用超滤膜包对步骤5回收的病毒液进行4‑10倍浓缩，得到纯化后的禽腺病毒。本发明的纯化方法可在保持病毒具有良好活性的前提下对病毒液中的杂蛋白进行高效纯化，方便病毒的后续生物学应用。
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公开(公告)号：CN110885905A
公开(公告)日：2020-03-17
申请号：CN201911101455.1
申请日：2019-11-12
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与MGF360-505R基因缺失株LAMP检测引物及其试剂盒，所述LAMP检测引物包含两套引物，分别针对非洲猪瘟病毒野毒株保守的衣壳蛋白基因P72(B646L)序列和非洲猪瘟MGF360-505R基因缺失株第27942-35500位缺失区两侧，能特异性的检测出该非洲猪瘟MGF360-505R基因缺失株。本方法采用恒温反应的检测手段，仅需加热即可实现整个反应，检测结果可以直接目测，适合现场检测；所述方法检测灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快，可以作为有效鉴别非洲猪瘟病毒野毒株与MGF360-505R基因缺失株的基层检测手段。
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公开(公告)号：CN110804677A
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201910973936.5
申请日：2019-10-14
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6848 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和/或360-505R基因缺失株的巢式二重PCR检测引物及试剂盒，八对检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～8所示。本发明利用8对引物巢式二重扩增非洲猪瘟病毒CD2V和360-505R基因，减少了鉴定不同基因的检测成本和检测时间；可以辨别毒株是否存在基因的缺失，以及是否存在混合感染。对于传统巢式PCR，每次仅扩增一个基因来说，本发明每次PCR反应同时扩增两个基因，成本降低了约1/2；对于普通二重PCR来说，本发明灵敏度提高1010个数量级以上，可达1×10-18ng/μL，具有广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN106177993B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201610530297.1
申请日：2016-07-06
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明涉及动物医药生物工程领域，具体而言，涉及一种传染性法氏囊病病毒DNA疫苗及其构建方法，所述DNA疫苗为包含IBDV VP2基因、鸡Akirin2基因和鸡GM‑CSF基因的三基因共表达载体，能够利用一个载体实现对IBDV VP2、鸡Akirin2和鸡GM‑CSF三种基因的独立、等量共表达。作为DNA疫苗应用时，改善了VP2基因单独免疫产生IBD抗体水平低、提供的保护率低的状况，鸡Akirin2和鸡GM‑CSF在生物学功能上形成协同效应，共同促进IBDV VP2基因诱导的抵抗IBDV感染的免疫应答能力。
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公开(公告)号：CN110029129A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910169369.8
申请日：2019-03-06
Applicant: 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明公开一种基于慢病毒转染的表达鸡ST3GAL 1基因的MDCK稳转细胞株的构建方法，该方法使用悬浮母细胞，通过DMEM生长培养后得到贴壁细胞，稳定传代后进行转染实验，稳转成功并经传代培养至二十代后驯化成悬浮细胞进行接毒实验，相较于贴壁细胞生产禽流感病毒疫苗具有更大优势。
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