一种快速添加或替换目的基因的蛋白标签的方法

    公开(公告)号:CN111850022A

    公开(公告)日:2020-10-30

    申请号:CN202010628191.1

    申请日:2020-07-02

    Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域,公开了一种快速添加或替换目的基因的蛋白标签的方法,包括引物设计、目的基因和蛋白标签片段的扩增、表达载体双酶切及重组酶处理、转化、阳性转化子检测及测序比对。本发明在目的基因和蛋白标签的序列片段上,分别设计两对引物F1、R1和F2、R2,其中F1与R2要分别和表达载体插入位置要有至少15bp的同源臂,R1与F2之间也要有至少15bp的同源臂。目的基因片段、蛋白标签和载体片段在重组酶反应后,利用大肠杆菌转化体系就可以得到同时含有目的基因和添加蛋白标签的环状质粒,该方法适用于构建各种多标签表达载体,具有简单、快速和高效等特点。

    一种防控梨叶片异常脱落的方法

    公开(公告)号:CN111699897A

    公开(公告)日:2020-09-25

    申请号:CN202010417147.6

    申请日:2020-05-18

    Abstract: 本发明公开了一种防控梨叶片异常脱落的方法,即对梨树喷施外源赤霉素溶液就可有效防控梨叶片异常脱落。本发明研究发现,发生异常落叶树的叶柄离区中,有生理活性的GA3和GA4,以及赤霉素合成关键中间产物GA12含量均显著下降;喷施0.5~1.0mg/L赤霉素均可提高叶片保留率,而喷施1.0mg/L赤霉素后叶片保留的时间更长。喷施赤霉素30-40d时,梨树叶片的保留率增加最为显著,在两年的重复实验中分别增加1023.08%和65.56%。适宜浓度的赤霉素处理可以提高抗氧化酶活性,降低活性氧含量,延缓落叶的发生,能够有效防控梨异常落叶。

    一种重组果胶甲酯酶PbrPME的体外表达方法及其编码基因与应用

    公开(公告)号:CN110819649A

    公开(公告)日:2020-02-21

    申请号:CN201910951450.1

    申请日:2019-10-08

    Abstract: 本发明公开了一种重组果胶甲酯酶PbrPME的体外表达方法及其编码基因与应用。通过设计引物克隆梨PbrPME基因;构建大肠杆菌重组表达载体PbrPME-pCold-TF;将构建的重组表达载体PbrPME-pCold-TF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,构建表达梨PbrPME蛋白的重组菌株;对重组菌株进行表达,并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PbrPME蛋白;利用重组梨PbrPME蛋白处理梨花粉管,统计处理后花粉管长度,验证重组梨PbrPME蛋白活性。通过本发明的方法,实现了梨PbrPME蛋白的体外表达及其应用,完全可以满足相关实验的需求。

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