过氧化氢酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN114752576A

    公开(公告)日:2022-07-15

    申请号:CN202210362566.3

    申请日:2022-04-06

    申请人: 鲁东大学

    发明人: 张娟 冯志彬

    摘要: 本发明公开了一种过氧化氢酶突变体及其应用,所述突变体至少在初始型过氧化氢酶氨基酸序列的下列位置之一发生了突变:第67位异亮氨酸突变为苯丙氨酸、第102位蛋氨酸突变为亮氨酸、第200位缬氨酸突变为苯丙氨酸、第251位丙氨酸突变为丝氨酸,所述初始型过氧化氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。与初始过氧化氢酶BmCAT相比,过氧化氢酶突变体氨基酸序列发生了替换,形成的突变体显著提高了催化过氧化氢的能力。在利用乳酸氧化酶生物合成丙酮酸的过程中,采用表达该过氧化氢酶突变体的全细胞催化消除反应过程中产生的过氧化氢,酶的用量少,过氧化氢的消除率显著提高,产物丙酮酸的摩尔转化率最高达为99.7%,具有很高的工业化应用前景。

    一株高丝氨酸生产菌及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN112592875B

    公开(公告)日:2022-06-10

    申请号:CN202011461387.2

    申请日:2020-12-08

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一株高丝氨酸生产菌及其构建方法和应用,本发明通过阻断代谢途径中中间产物的分支途径,有效控制了代谢途径的流向;同时引入外源基因,在生产菌中引入新的途径,增加前体物草酰乙酸和天冬氨酸的含量;而且通过启动子替换使一些关键基因的表达水平提高,获得了高产L‑高丝氨酸的基因工程菌,丰富了L‑高丝氨酸的基因工程菌的来源,并且通过实验发现天冬氨酸的产量高52.3g/L,糖酸转化率达44.6%,和现有技术相比,产量和糖酸转化率得到明显的提高,具有一定的优势,更具有大规模生产的应用潜力。

    大豆GmPCBER4基因、蛋白及应用

    公开(公告)号:CN113249393A

    公开(公告)日:2021-08-13

    申请号:CN202110524880.2

    申请日:2021-05-13

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一种大豆GmPCBER4基因、蛋白及应用,所述GmPCBER4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。将该基因导入目的植物,得到转基因植物,发现过表达基因GmPCBER4能够明显提高植株的产量,在相同逆境处理下转基因植物,发现该转基因植物的抗盐性和抗旱性均比野生植株强。这说明GmPCBER4基因可用于调节植物抗逆性,并且本发明对于植物育种具有重大的应用价值。

    一种酶法制备4-羟基苯乙醛的方法

    公开(公告)号:CN110499343B

    公开(公告)日:2021-06-04

    申请号:CN201910856791.0

    申请日:2019-09-11

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一种酶法生产4‑羟基苯乙醛的方法,属于生物技术领域,所述方法为克隆高活性的伯胺氧化酶基因,连接表达载体并转化大肠杆菌感受态细胞,构建伯胺氧化酶工程菌,进而利用发酵的伯胺氧化酶催化酪胺氧化生产4‑羟基苯乙醛。本发明采用酶法生产4‑羟基苯乙醛,反应条件温和、环境友好、生物酶催化反应专一性强,采用两相催化体系降低产物对酶的抑制效应,反应产率高,且催化与分离耦合,有利于产物提取,同时本发明所述的生产方法所使用的原料廉价易得,且生产工艺简单易行、生产成本较低。

    从发酵液中提取L-高丝氨酸的方法

    公开(公告)号:CN112694413A

    公开(公告)日:2021-04-23

    申请号:CN202110309816.2

    申请日:2021-03-24

    申请人: 鲁东大学

    IPC分类号: C07C227/40 C07C229/22

    摘要: 本发明涉及L‑高丝氨酸提取领域,尤其涉及一种从发酵液中提取L‑高丝氨酸的方法。包括以下步骤:发酵液预处理、脱色、电去离子和浓缩过滤,得到L‑高丝氨酸。本发明首次采用电去离子技术对L‑高丝氨酸发酵液进行除盐处理,与电渗析技术相比电去离子技术的除盐率提高10%,与离子交换技术相比电去离子技术中添加的树脂不需要再生,减少了大量酸碱的使用,可节省用水量70%。

    一株枯草芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN111778199A

    公开(公告)日:2020-10-16

    申请号:CN202010925776.X

    申请日:2020-09-07

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一株枯草芽孢杆菌及其应用,所述菌株为枯草芽孢杆菌LD003(Bacillus subtilis),于2020年6月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为:CGMCC NO.20097。这是一株高效产腈水解酶的菌株,培养方法简单,生长速度快,不易变异,遗传稳定性好,培养基成分简单,原料成本低,产生的腈水解酶活力高,底物广谱,对3-吲哚丙腈、2-氨基丁腈、肉桂腈、丙烯腈具有较高的酶活性,可以直接用于酶法制备3-吲哚丙酸、2-氨基丁酸、肉桂酸等,具有很高的工业应用优势。

    一株产酪氨酸解氨酶的菌株及应用

    公开(公告)号:CN111424005A

    公开(公告)日:2020-07-17

    申请号:CN202010540640.7

    申请日:2020-06-15

    申请人: 鲁东大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12P7/42 C12R1/01

    摘要: 本发明涉及一株产酪氨酸解氨酶的菌株及应用,属于生物技术领域,所述菌株分类命名为约氏不动杆菌Acinetobacter johnsonii,已于2020年5月15日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号:CGMCC No.19831。本发明提供的菌株遗传稳定性好,培养成本低,产生的酪氨酸解氨酶酶活力高,适用底物谱较宽,可直接利用该菌株直接转化合成对羟基肉桂酸及衍生物,催化合成时无需加入表面活性剂、有机溶剂等透膜剂,避免引入外源杂质,有利于提取分离操作,工业应用具有优势。

    一种酶法制备4-羟基苯乙醛的方法

    公开(公告)号:CN110499343A

    公开(公告)日:2019-11-26

    申请号:CN201910856791.0

    申请日:2019-09-11

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一种酶法生产4-羟基苯乙醛的方法,属于生物技术领域,所述方法为克隆高活性的伯胺氧化酶基因,连接表达载体并转化大肠杆菌感受态细胞,构建伯胺氧化酶工程菌,进而利用发酵的伯胺氧化酶催化酪胺氧化生产4-羟基苯乙醛。本发明采用酶法生产4-羟基苯乙醛,反应条件温和、环境友好、生物酶催化反应专一性强,采用两相催化体系降低产物对酶的抑制效应,反应产率高,且催化与分离耦合,有利于产物提取,同时本发明所述的生产方法所使用的原料廉价易得,且生产工艺简单易行、生产成本较低。

    一种酶法合成丹参素的方法

    公开(公告)号:CN108424937A

    公开(公告)日:2018-08-21

    申请号:CN201810396471.7

    申请日:2018-04-27

    申请人: 鲁东大学

    摘要: 本发明公开了一种新型的合成丹参素合成方法,所述方法是利用酪氨酸解氨酶酶、苯丙酮酸还原酶和葡萄糖脱氢酶催化左旋多巴生产丹参素。具体是将左旋多巴(3,4-二羟基苯基丙氨酸)0.5-1.5mol、酪氨酸解氨酶湿菌体10-30g/L、苯丙酮酸还原酶湿菌体10-30g/L、葡萄糖脱氢酶湿菌体10-30g/L置于反应器中混合均匀,调节pH值为7.0,温度为30℃,催化反应16-20h,得到丹参素。该方法首次利用酪氨酸解氨酶、苯丙酮酸还原酶和葡萄糖脱氢酶,以左旋多巴为底物酶法生产丹参素,节省原料,避免了化学合成的污染。

    生产β-丙氨酸的工程菌构建及其生产β-丙氨酸的方法

    公开(公告)号:CN107338258A

    公开(公告)日:2017-11-10

    申请号:CN201710013700.8

    申请日:2017-01-09

    申请人: 鲁东大学

    发明人: 冯志彬 张娟

    摘要: 一种生产β-丙氨酸的工程菌构建及其生产β-丙氨酸的方法,属于生物技术领域,本发明提供一株特基拉芽孢杆菌的L-天冬氨酸α-脱羧酶基因,见SEQ.NO.1,以及包含所述PanD基因的工程菌;本发明还提供产L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌的构建方法,并通过表达和分泌获得的L-天冬氨酸α-脱羧酶转化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸。本发明是国内外第一次使用来源于特基拉芽孢杆菌内的L-天冬氨酸α-脱羧酶转化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸,该酶在大肠杆菌内表达后,产生的L-天冬氨酸α-脱羧酶酶活力高,菌体无需破碎,即可直接用于转化,最高可以转化180g/L的L-天冬氨酸,β-丙氨酸产量达到119.8g/L,工业应用具有优势。