公开(公告)号：CN112725348B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN201911029085.5

申请日：2019-10-28

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 李娟 ,  魏鹏程 ,  秦瑞英 ,  许蓉芳 ,  李浩 ,  刘小双 ,  徐善斌

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/55 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT，还提供包含该ABEHPT的一种表达载体，以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后，能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因，通过潮霉素筛选，提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量，从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明，利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升，在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN111690650B

公开(公告)日：2022-03-25

申请号：CN202010619913.7

申请日：2020-06-30

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 许蓉芳 ,  秦瑞英 ,  李娟 ,  刘小双 ,  廖圣祥

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/84 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供一种植物热诱导表达启动子Posheat5及其应用。本发明还提供了含有该启动子的表达盒、植物表达载体、宿主菌和转化子。具体而言，本发明获得了上述启动子并将上述启动子应用在植物转基因工程中。本发明提供的启动子可以在热诱导的条件下驱动外源基因在植物中表达，适用于单子叶禾谷类植物，尤其能够驱动外源基因在水稻植株中诱导表达，因此可以用于提高和改善水稻的生长特性，从而培育出理想的耐热水稻品种。

公开(公告)号：CN112746084A

公开(公告)日：2021-05-04

申请号：CN201911054343.5

申请日：2019-10-31

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 许蓉芳 ,  秦瑞英 ,  李娟 ,  刘小双 ,  廖圣祥 ,  魏鹏程 ,  李浩

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/65 ,  C12N15/11 ,  A01H1/04

Abstract: 本发明提供了一种实现单轮筛选全阳性的肉眼可视水稻基因筛选方法，所述方法包括培养愈伤组织；合成序列表中SEQ ID No.1中所示序列的筛选标记基因，扩增后连接于载体中形成植物表达载体，转入根癌农杆菌；将愈伤组织与农杆菌接触10‑30分钟，其中，所述农杆菌中引入了所述植物表达载体，所述植物表达载体中携带所述筛选标记基因；进行愈伤组织培养；取带有颜色、状态良好的愈伤组织进行分化再生。并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在遗传转化方面的应用。本发明利用Cb基因构建植物表达载体，导入水稻细胞后造成水稻转化阳性愈伤呈深绿色。

公开(公告)号：CN112626049A

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN202011481713.6

申请日：2020-12-14

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 李娟 ,  许蓉芳 ,  秦瑞英 ,  刘小双 ,  单调风 ,  魏鹏程

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRRH基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRRH突变体，发现利用该SpCas9‑NRRH突变体进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRRH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。

公开(公告)号：CN110878305A

公开(公告)日：2020-03-13

申请号：CN201911249683.3

申请日：2019-12-09

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 许蓉芳 ,  李娟 ,  秦瑞英 ,  刘小双 ,  单调风 ,  廖圣祥 ,  魏鹏程

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明提供了一种高效的单碱基编辑系统OsSpCas9-eCDA及其应用和育种方法。本发明通过大量的实验，尝试采用不同的方式对SpCas9-ABE进行改造，终于成功获得了一个高单碱基编辑效率、宽窗口的CP1249-OsSpCas9-eABE编辑器。并且本发明还提供了包含该CP1249-OsSpCas9-eABE基因的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用设计的CP1249-OsSpCas9-eABE基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的单碱基替换，特别是实现由A/T碱基突变成C/G。利用该编辑器进行水稻基因编辑，可以编辑更多的突变体，获得更多的随机突变或者得到突变更多的突变体库。