公开(公告)号：CN109517808A

公开(公告)日：2019-03-26

申请号：CN201811389187.3

申请日：2018-11-21

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  冯涛声 ,  陈瑞爱 ,  梁佳琪 ,  李延鹏 ,  李淑敏 ,  袁丽霞 ,  朱庆春 ,  罗琼 ,  熊挺

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N15/63 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一株M蛋白糖基化位点突变的传染性支气管炎病毒及其制备方法与应用。本发明利用反向遗传学技术，获得IBV全长感染性克隆，再以其为模板，对IBV M蛋白糖基化位点进行N→D的点突变，体外转录电转染细胞后获得IBV M蛋白突变病毒株。该突变株的获得有助于研究IBV M蛋白糖基化位点突变对M蛋白的结构、病毒的增殖能力及其对细胞内质网压力的影响，判断病毒的复制能力和致病力是否发生改变，并且为研制IBV减毒疫苗提供了参考方法。

公开(公告)号：CN109517809B

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN201811449640.5

申请日：2018-11-30

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯涛声 ,  刘定祥 ,  陈瑞爱 ,  李淑敏 ,  李延鹏 ,  梁佳琪 ,  袁丽霞 ,  朱庆春 ,  罗琼 ,  熊挺

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明公开了一株缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒及制备方法与应用。本发明将野生型传染性支气管炎病毒的E蛋白的第26位氨基酸由丙氨酸突变为苯丙氨酸，得到的缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒。本发明通过构建缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒，以及获得了回复突变体，对突变后的病毒进行分离纯化方法及其特性分析，有助于开发特异性的抗病毒药物和预防病毒感染的有效疫苗，对冠状病毒的研究具有重大的公共卫生和经济意义。

公开(公告)号：CN112813038A

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN202110102802.3

申请日：2021-01-26

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 刘定祥 ,  黄梅 ,  冯涛声 ,  代过

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/66 ,  A61K39/295 ,  A61P31/14 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明公开了一株表达ASFV结构囊膜蛋白的PRRS病毒及其构建方法与应用。本发明通过将ASFV结构囊膜蛋白基因克隆入上游设置T7启动子的PRRS病毒基因组中的非结构蛋白基因与结构蛋白基因之间；在结构囊膜蛋白基因和结构蛋白基因之间设置调控序列；再对所得到的序列进行转录，得到的RNA转染细胞，收集病变的细胞，得到表达ASFV结构囊膜蛋白的PRRS病毒。本发明提供的构建方法可快速获得含有ASFV和PRRSV免疫原的重组病毒，从而为开发多效价疫苗奠定基础。

公开(公告)号：CN112301054A

公开(公告)日：2021-02-02

申请号：CN202011145191.2

申请日：2020-10-23

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯涛声 ,  刘定祥 ,  李淑敏 ,  丘祖纯

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C07K14/165 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明公开了一种利用K1E噬菌体RNA聚合酶和启动子的双质粒系统在真核细胞质表达蛋白的方法。本发明通过将NP868R帽状酶片段构建至含有K1E RNA聚合酶表达序列的载体，得到重组载体A；将目的蛋白的cDNA序列构建至含有K1E启动子的载体，得到重组载体B；将重组载体A和重组载体B转染至宿主真核细胞中进行表达，得到目的蛋白。本发明提供的方法能将难以通过传统蛋白外源表达方法表达的蛋白进行表达，有助于开发特异性的抗病毒药物和预防病毒感染的有效疫苗。

公开(公告)号：CN111926025A

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN202010346610.2

申请日：2020-04-27

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 陈瑞爱 ,  王楠楠 ,  刘定祥 ,  黄梅 ,  杜倩茹 ,  叶俊贤 ,  罗琼

IPC: C12N15/45 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明涉及反向遗传操作技术领域，公开了一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法。分别将新城疫病毒的NP、P和L基因以及表达T7 RNA聚合酶的DE3基因克隆进pXJ40载体，获得质粒pXJ40-NP、pXJ40-P、pXJ40-L和pXJ40-DE3；将新城疫病毒的全基因组cDNA克隆进pBR322质粒中得到pBR322-DHN3；将NP基因编码区部分密码子统一替换成使用频率最高的密码子，替换到pBR322-DHN3质粒上，形成新质粒pBR322-mNPDHN3；采用上述5种质粒共转染BHK-21细胞，得到拯救病毒rDHN3-mNP。本发明方法更利于病毒的拯救和病毒致病机制的研究。

公开(公告)号：CN110592031A

公开(公告)日：2019-12-20

申请号：CN201910910558.6

申请日：2019-09-25

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 冯涛声 ,  刘定祥 ,  朱庆春 ,  梁佳琪 ,  梁潇颖

IPC: C12N7/01 ,  G01N21/76

Abstract: 本发明提供一株S蛋白融合HiBiT的传染性支气管炎重组病毒及制备方法与应用。本发明是将野生型传染性支气管炎病毒(IBV)的S蛋白水解切割位点处第539位插入HiBiT的氨基酸，并在HiBiT前后各加上4个连接氨基酸，获得IBV突变型病毒株。该突变株的获得有助于研究IBV HiBiT-S2融合蛋白的结构、病毒的增殖能力、形成空斑的大小，并可判断病毒的复制能力和致病力是否发生改变，并且为定量IBV提供了新方法。