一种EDDS裂合酶固定化酶的制备方法和应用

    公开(公告)号:CN111454934A

    公开(公告)日:2020-07-28

    申请号:CN202010279909.0

    申请日:2020-04-10

    Abstract: 本发明涉及一种EDDS裂合酶固定化酶的制备方法和应用,属于生物技术领域。为了解决现有的纯度差和转化率不高的问题,提供一种EDDS裂合酶固定化酶的制备方法,该方法包括将带有His-tag的EDDS裂合酶的基因工程菌经发酵及粗提后得到EDDS裂合酶粗酶液;粗酶液与金属亲和载体接触,使EDDS裂合酶吸附到金属亲和载体上进行纯化;将金属亲和载体上的EDDS裂合酶进行洗脱,得到纯化后的酶液;将酶液和固定化载体进行固定,得到带有His-tag的EDDS裂合酶固定化酶,用于以富马酸和乙二胺为底物合成(S,S)-EDDS。本发明能有效除去酶液中富马酸酶,起到高效纯化效果;且有高效酶活能力和高重复利用率。

    一种利用高温破壁制备重组酶的方法

    公开(公告)号:CN105255844B

    公开(公告)日:2019-07-09

    申请号:CN201510683704.8

    申请日:2015-10-20

    Inventor: 杨仲毅

    Abstract: 本发明涉及一种利用高温破壁制备重组酶的方法,属于生物工程技术领域。为了解决现有的破壁效果差的问题,提供一种利用高温破壁制备重组酶的方法,该方法包括将含有表达重组酶的重组大肠杆菌接种到经过灭菌处理的发酵培养基中进行活化培养,使菌体活化之后再加入诱导剂,然后,再控制温度在25℃~37℃进行低温发酵培养;低温发酵培养结束之后,将温度升温至39℃~60℃继续进行高温发酵培养,高温发酵培养结束之后,直接从发酵液中提取相应的目标重组酶,得到相应的目标重组酶。本发明的方法能够使细胞在培养过程中就能够使细胞壁处于破壁状态,达到高效的破壁效果。

    一种利用重组酰亚胺酶合成(R)-异丁基戊二酸单酰胺的方法

    公开(公告)号:CN113502305B

    公开(公告)日:2024-01-30

    申请号:CN202110807361.7

    申请日:2021-07-16

    Abstract: 本发明涉及一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,属于药物中间体合成技术领域。为了解决现在的反应不佳的问题,提供一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,该方法包括使底物异丁基戊二酰亚胺在重组酰亚胺酶的催化作用下,转化反应生成产物(R)‑异丁基戊二酸单酰胺;重组酰亚胺酶的基因序列如SEQ ID NO.1所示,重组酰亚胺酶的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过采用酶法催化,实现具有高活性和反应位点的高选择性,能够优先催化环状亚胺结构的基团水解形成二羧基单酰胺的结构,且形成的产物具有高手性R型选择性和去对称化反应,从而也能够达到高手性产物收率的效果。

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