一种海洋酶催化不对称还原制备手性叔亮氨酸的方法及酶

    公开(公告)号:CN104561161A

    公开(公告)日:2015-04-29

    申请号:CN201410803002.4

    申请日:2014-12-22

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种海洋酶催化不对称还原制备手性叔亮氨酸的方法及酶,属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到亮氨酸脱氢酶来源于柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei),经过菌株培养,基因克隆,构建工程菌,细胞制备,在加入氨基供体和辅助底物情况下,细胞催化三甲基丙酮酸不对称还原胺化得到产物手性叔亮氨酸。本发明确定了基于该酶所构建工程菌的全细胞催化三甲基丙酮酸不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明操作方便,设备简单,在生物催化制备手性叔亮氨酸领域具有较好的工业应用前景,对于今后生物催化专用酶源的开发和手性化合物合成方法的研究具有较为重要的意义。

    一种丁酸梭菌及其应用
    22.
    发明公开

    公开(公告)号:CN104560779A

    公开(公告)日:2015-04-29

    申请号:CN201410696268.3

    申请日:2014-11-26

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12R1/145 C12N1/20 C12P7/18

    Abstract: 本发明公开了一种丁酸梭菌及其应用,该丁酸梭菌于2014年9月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCCNO.9626。本发明的丁酸梭菌易于培养,具有较高的1,3-丙二醇转化率和1,3-丙二醇生产强度,而且对底物和产物具有较高的耐受性。

    一种固定化耦联双酶制备L-叔亮氨酸的方法

    公开(公告)号:CN104480100A

    公开(公告)日:2015-04-01

    申请号:CN201410695848.0

    申请日:2014-11-26

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 陆吉学

    Abstract: 本发明公开了一种固定化耦联双酶制备L-叔亮氨酸的方法,包括如下步骤:(1)制备纤维素载体;(2)制备固定化耦联双酶;(3)将上述固定化耦联双酶与底物和辅酶在pH=6.0~11.0的NH4Cl-NH3缓冲体系中反应,制备L-叔亮氨酸。本发明的方法利用生物工程菌构建固定化耦联在纤维素载体上的亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶来生产L-叔亮氨酸,产品转化率高,反应条件温和,操作简单,昂贵的辅酶可再生,酶可回收利用,提高了酶的利用效率,适合工业化生产。

    一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法

    公开(公告)号:CN104152384A

    公开(公告)日:2014-11-19

    申请号:CN201410389897.1

    申请日:2014-08-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种海洋菌株催化不对称还原制备手性苯丙氨酸的方法,涉及手性苯丙氨酸。所述南海芽孢杆菌(Bacillus nanhaiensis)DSF-15A2,保藏中心登记入册编号为CGMCC No.8969。将菌种接入2216L培养基中培养,得发酵液,离心获得细胞,用缓冲液重悬、洗涤,配制成细胞液;在细胞液中,加入苯丙酮酸和氨基供体作为底物,再加入辅助底物用于辅酶循环再生,反应后得到含有产物L-苯丙氨酸的反应液,离心去除沉淀,上清液加入等量的甲醇,震荡混合均匀,离心去除沉淀(蛋白质),上清液稀释后进行测定,苯丙酮酸的浓度用高效液相色谱检测,产物L-苯丙氨酸的浓度和对映体过量值用高效液相色谱测定。

    一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用

    公开(公告)号:CN102965323B

    公开(公告)日:2014-03-12

    申请号:CN201210568673.8

    申请日:2012-12-24

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用,涉及1,3-丙二醇。提供丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Gen160以及利用废甘油生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用。步骤为取采集样品加入到白菜汁中,富集培养后置水浴,杀死非芽孢菌,转入梭菌增殖液体培养基,厌氧培养再置水浴,转入发酵培养基,厌氧选择性富集培养后进行高效液相色谱分析发酵产物,选取能生产1,3-丙二醇的阳性菌;采用高层琼脂柱法分离出单菌落;进行好氧和厌氧培养,除去兼性厌氧菌,得到严格厌氧菌,分析发酵产物,选取能够生产1,3-丙二醇和培养特征、菌落形态均符合丁酸梭菌培养特征的菌株进行16S rDNA序列分析鉴定。

    一种利用固定化细胞转化甘油生产乳酸的方法

    公开(公告)号:CN103555777A

    公开(公告)日:2014-02-05

    申请号:CN201310576790.3

    申请日:2013-11-15

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 严正平

    Abstract: 一种利用固定化细胞转化甘油生产乳酸的方法,涉及乳酸。将菌种接入含甘油的种子培养基中培养得种子液,再接入含甘油的扩大培养液扩大培养,流加碱溶液将扩大培养液的pH值控制在4.5~7.5,当扩大培养液中的菌体细胞浓度达到1.0~15.0g/L时,利用泵将扩大培养液泵入反应器内,当扩大培养液完全充满反应器后,维持扩大培养液在发酵罐和反应器中的循环,当游离菌体细胞浓度降至最低点时,视为固定化过程结束;菌体细胞固定化完成后,加入含甘油的发酵培养基控制初始甘油浓度为5~200g/L,或直接更换初始甘油浓度为5~200g/L的发酵培养基,进行固定化发酵后得乳酸。

    一种用阳离子树脂吸附提取发酵液中1,3-丙二醇的方法

    公开(公告)号:CN102795962A

    公开(公告)日:2012-11-28

    申请号:CN201210327740.7

    申请日:2012-09-06

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种用阳离子树脂吸附提取发酵液中1,3-丙二醇的方法,涉及微生物发酵产品的分离方法。将1,3-丙二醇发酵液pH调至1~7,加入絮凝剂和活性炭,搅拌,静置并自然沉降;通过离心或过滤的方法除去所得的发酵液中的菌体、蛋白质以及其他不溶性固型颗粒,得到上清液;用阳离子树脂吸附所得的上清液中的1,3-丙二醇,上柱流速为0.5~2.0mL/min;树脂柱吸附饱和后,洗涤,洗脱,收集洗脱液;将所得的含有1,3-丙二醇的洗脱液减压蒸馏,获得98%~99.6%的1,3-丙二醇产品。无污染,投资少,不仅可降低1,3-丙二醇的分离成本,而且节省时间,提高生产效率。

    基于丁酸梭菌发酵的1,3-丙二醇的发酵液蒸发浓缩模拟方法

    公开(公告)号:CN116236798A

    公开(公告)日:2023-06-09

    申请号:CN202211653613.6

    申请日:2022-12-22

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明提供了一种基于丁酸梭菌发酵的1,3‑丙二醇的发酵液蒸发浓缩模拟方法,其包括:采用两相闪蒸器模型和换热器模型构建多效蒸发浓缩模型;通过所述进料口进行进料;其中,料液包括PDO、甘油和水;设定进料流量、生蒸汽压力和蒸发温度;控制浓缩至设定的发酵液体积,并采集不同操作压力下的PDO损失率,以获得PDO损失率与发酵液体积的关系;通过改变两相闪蒸器模型的蒸发温度模拟PDO损失率与浓缩液含水量的关系;根据PDO损失率与发酵液体积的关系、PDO损失率与浓缩液含水量的关系优化1,3‑丙二醇的发酵液蒸发浓缩的工作参数。本发明能优化发酵液蒸发浓缩的工作参数。

    一种苹果酸脱氢酶PbMDH及其编码序列和应用

    公开(公告)号:CN109337879B

    公开(公告)日:2021-01-26

    申请号:CN201811573414.8

    申请日:2018-12-21

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明提供一个来自于蒌叶假单胞菌Pseudomonas beteli的苹果酸脱氢酶PbMDH,该苹果酸脱氢酶的编码基因及其应用。本发明提供的带有苹果酸脱氢酶PbMDH核苷酸序列的克隆质粒可以通过转导、转化、结合转移的方法转入工程菌中,通过调节所述编码基因的表达,能够高效表达苹果酸脱氢酶PbMDH,为苹果酸脱氢酶的生产提供有效途径。本发明提供的海洋来源的苹果酸脱氢酶具有耐盐耐高温的性能,具有重要的工业化应用前景。

    一种利用氧化石墨烯-金属离子配位固定化酶的方法

    公开(公告)号:CN106191025B

    公开(公告)日:2019-06-14

    申请号:CN201610541498.1

    申请日:2016-07-11

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用氧化石墨烯‑金属离子配位固定化酶的方法,属于固定化酶技术领域。在固定化过程中,过渡态金属离子可以与氧化石墨烯的羧基配位,并通过配位作用固定化甲酸脱氢酶。片层结构的氧化石墨烯是一种优良的固定化载体,表面带有环氧基、羰基、羧基等功能性基团,负载面积大。利用金属离子的配位作用,不仅可使氧化石墨烯均匀分散,增大酶的负载量,并且通过与酶组氨酸标签的配位相互作用,实现酶在石墨烯上的固定化。本发明的优点在于工艺简单、制备条件温和、固定化率高。所得固定化酶的温度稳定性、pH稳定和和重复使用稳定性明显增强,同时具有较高的酶活性回收率。

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