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公开(公告)号：CN102154320A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201110039094.X
申请日：2011-02-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 菊花抗逆转录因子DgZFP1及其植物表达载体和构建方法及应用，本发明属于分子生物学领域。本发明所构建的表达载体pCAMBIA1301-DgZFP1是由DgZFP1基因插入到克隆载体pMD19-T simple vector(Takara)，经BamHI (Takara)和KpnI (Takara)双酶切后连接到载体pCAMBIA1301(Invitrogen)的BamHI和KpnI位点而得到的重组质粒。将该植物表达载体用于植物遗传转化，DgZFP1基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成DgZFP1蛋白，调控下游基因的表达，提高植物耐盐性。
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公开(公告)号：CN111394800B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010175583.7
申请日：2020-03-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C40B50/06 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种新的评估由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的方法，该方法能够体现文库中插入基因数量、基因丰度等关键性指标，解决了传统的由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量评估方法的片面性，适合一般的实验室进行准确的文库评估。该方法通过文库15轮循环数的PCR扩增、产物回收之后的浓度测定和电泳情况初步判断，之后将回收产物进行高通量测序、de novo组装后详细分析，获得文库的插入基因数量、基因丰度等关键性指标，完成由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的准确评估。同时，还能获得无参考基因组物种基因的序列信息，为下一步互作蛋白编码基因的克隆提供基础。
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公开(公告)号：CN109792953B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN201910085888.6
申请日：2019-01-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种菊花组培方法。本发明发包括配制多种抑菌剂组合的抑菌培养基，并向其中接种自然界广泛存在且易提取的灰绿青霉，使灰绿青霉在抑菌剂的作用下处于潜伏状态，并不引起真菌污染，在这种培养基中培养的菊花组培苗生长发育状况和炼苗后的表现均正常，对菊花种苗的产量和质量均无影响；将抑菌培养基中的菊花组培苗接种到普通培养基中，没有抑菌剂的抑制作用，组培苗大范围爆发真菌污染且污染率达100％。通过此方法在保证菊花组培苗生产效率与质量的同时，能够有效保护菊花的知识产权品种，只有拥有品种授予权的单位可以获得健康的组培苗，防止优良品种非法外流。
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公开(公告)号：CN113930445A
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN202111120827.2
申请日：2021-09-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种在头状花序中实现基因瞬时转染的方法，涉及基因工程技术领域，本发明提供的在头状花序中实现基因瞬时表达的方法，采用真空渗透作用瞬时转化带蕾插穗生根、开花的植物头状花序，瞬时转化5‑7天即可实现可检测量的目的基因的转染，此方法具有操作简单、转化周期短、转化效率高等优点，并且可以实现高效率的头状花序中外源基因瞬时表达，克服了头状花序难以转化成功的难题，为植物开花基因功能研究奠定了方法学基础，为分子育种和品种改良提供方法，具有较高的实用性和科研应用价值。
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公开(公告)号：CN104372019B
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201410569007.5
申请日：2014-10-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，提供包括有CmWRKY48基因的重组载体、转化细胞、转CmWRKY48基因切花菊的培育、鉴定方法及应用。转CmWRKY48基因切花菊的培育方法包括如下步骤：(1)菊花CmWRKY48基因的克隆(2)植物表达载体pMDC43‑CmWRKY48的构建(3)农杆菌EHA105介导叶盘法转化菊花。对转化植株进行PCR、定量RT‑PCR检测证实CmWRKY48基因已整合到转基因植株基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行抗蚜性检测，转基因植株抗蚜能力有很大提高，为利用基因工程技术选育菊花抗逆品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106381302A
公开(公告)日：2017-02-08
申请号：CN201610818826.8
申请日：2016-09-12
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/001 , C12N15/8203 , C12N15/8218 , C12Q1/6895
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，公开了基于TRV-VIGS技术快速鉴定菊花脑基因功能的方法，通过构建含有内源目的基因片段的TRV2病毒沉默表达载体质粒，借助叶片注射法瞬时转化菊花脑，诱导菊花脑内源目的基因发生沉默，从而鉴定该内源目的基因的功能。本发明方法建立了TRV-VIGS沉默菊花脑内源基因从而鉴定基因功能的体系，其具有快速，高通量，易于操作等优势，为开展菊花脑基因功能研究提供了新途径。
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公开(公告)号：CN103882054B
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201410131935.3
申请日：2014-04-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法，该外源基因为GUS基因，由携带35s启动子及终止子，小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括（1）植株的获得（2）植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建（3）侵染液制备（4）菊花叶片的制备（5）叶片转化（6）叶片转化后培养7）阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株，通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体；同时，以P19与农杆菌混合培养制成侵染液，P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应，提高表达量，并且合理优化共培养条件，使该方法转化时间缩短至45天左右，转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。
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公开(公告)号：CN104498475A
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201410695615.0
申请日：2014-11-26
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供一种菊花抗旱性关联分子标记的获得方法，用于菊花抗旱性优良基因的定位和克隆及菊花新品种的培育。该获得方法包括a.抗旱性鉴定；b.菊花品种群体结构分析；c.菊花品种亲缘关系分析；d、与菊花抗旱性紧密关联的分子标记的确定。本方法同时运用SRAP、SCoT和EST-SSR三种分子标记技术，原理各不相同且各有针对，得到的染色条带多态性好，重复性高，可以覆盖整个基因组且条带数量非常丰富，有利于获得与抗旱性紧密相关的分子标记。共获得菊花抗旱性关联分子标记8个，实现优良抗旱品种提早选择，定向选择和准确选择，可以减少工作量，大大提高菊花抗旱基因型的选择效率，从而加快育种进程。
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公开(公告)号：CN103882054A
公开(公告)日：2014-06-25
申请号：CN201410131935.3
申请日：2014-04-02
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种通过农杆菌注射渗透法将外源基因转入菊花或近缘种进行瞬时表达的方法，该外源基因为GUS基因，由携带35s启动子及终止子，小于10kb的过量表达载体质粒携带。主要步骤包括（1）植株的获得（2）植物表达载体pORER1-2×35s:gus的构建（3）侵染液制备（4）菊花叶片的制备（5）叶片转化（6）叶片转化后培养（7）阳性转化叶片检测。本发明通过选择合适的外植体、以农杆菌菌株作为易感菌株，通过利福平和卡那霉素选择侵染菌体；同时，以P19与农杆菌混合培养制成侵染液，P19能有效抑制植物对外源导入载体表达的沉默效应，提高表达量，并且合理优化共培养条件，使该方法转化时间缩短至45天左右，转化效率达到60%以上。本发明方法为更有效地筛选和分析菊花基因功能、蛋白质定位及进一步获得稳定转化子提供了可能。
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公开(公告)号：CN103233075A
公开(公告)日：2013-08-07
申请号：CN201310170677.5
申请日：2013-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性，在转录组测序的基础上，结合Perl编程语言方法，对大量序列信息进行批量处理，进行SSR序列查找和SSR标记引物设计，克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证，若有条带检测出，即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物，为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。
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