公开(公告)号：CN115452974B

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202211005491.X

申请日：2022-08-22

Applicant: 浙江大学

Inventor： 王凤芹 ,  汪以真 ,  路则庆 ,  程远之

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06 ,  G01N30/34 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明公开了一种测定饲料中大观霉素的方法。试样中大观霉素用2%三氯乙酸水溶液（含0.4%乙二胺四乙酸二钠）提取，提取液经调节pH值至4.7±0.2，由混合型阳离子固相小柱净化，采用HILIC色谱柱分离，液相色谱质谱‑质谱联用法测定，基质匹配外标法定量。结果表明：本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法对饲料中大观霉素检出限为1.0 mg/kg，定量限为2.0 mg/kg。不同饲料基质中大观霉素浓度在0.1~10.0μg/mL范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99。大观霉素的回收率为91.3%~104.2%，相对标准偏差（RSD）为1.5%~9.4%。本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法灵敏、可靠，可应用于饲料中大观霉素的准确测定。

公开(公告)号：CN117757698A

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202410104098.9

申请日：2024-01-25

Applicant: 浙江大学

Inventor： 单体中 ,  涂羽昂 ,  刘事奇 ,  汪以真 ,  王凤芹

IPC: C12N1/20 ,  A23L5/20 ,  A23L33/135 ,  A23K10/18 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明提供了一种枯草芽孢杆菌DYF4‑3，该菌株保藏于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 20232187。本发明提供的枯草芽孢杆菌DYF4‑3在短时间内具有优异的呕吐毒素，黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮降解效果，DYF4‑3处理48h后对浓度为20μg/mL的DON、AFB1和ZEN降解率分别为96.63％、90.59％、84.57％。并且，在pH＝2、3、4的培养基中存活率达到31.57％、67.64％、75.91％；在含有0.1％、0.3％、0.5％牛胆盐的培养基中存活率达到114.74％、77.19％、61.06％，证明其具有的较强的胃肠道生存能力。

公开(公告)号：CN117316269A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311130887.1

申请日：2023-09-04

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  姜子鹏 ,  苏维发 ,  杨铭志 ,  龚焘 ,  靳明亮 ,  路则庆 ,  王凤芹 ,  王新霞

IPC: G16B20/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/75 ,  G16B50/30 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌的筛选方法及基因工程方法。鉴定菌株的次级代谢基因、毒力因子、抗生素耐药基因；筛选具有抑制致病菌的能力的次级代谢簇基因，包括Bacillaene（多烯类）、Macrlactin H（大环内酰亚胺H）、Bacilysin（抗菌二肽溶杆菌素）和Bacillibatin（儿茶酚型嗜铁素）和Fengycin（芬荠素脂肽）；根据毒力因子数据库（VFDB）筛选具有无毒力或低毒力的益生菌菌株；根据抗生素综合抗生素耐药性数据库（CARD）对菌株基因组进行分析，筛选不具有抗生素耐药基因或具有较少抗生素耐药基因的益生菌；所述的解淀粉芽孢杆菌，用于制备预防断奶仔猪产气荚膜梭菌感染中的直接饲用微生物或饲料，用于预防产气荚膜梭菌感染，降低肠道炎症损伤等。

公开(公告)号：CN116286496B

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202310132121.0

申请日：2023-02-19

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  何欢 ,  杨铭志 ,  都帅 ,  姜子鹏 ,  开丽霞 ,  靳明亮 ,  路则庆 ,  王凤芹

IPC: C12N1/20 ,  A23K10/18 ,  A23K50/60 ,  A23K50/30 ,  A23K20/163 ,  C12R1/25 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种降低断奶仔猪腹泻的复合益生菌及其应用。所述复合益生菌由婴儿双歧杆菌BI‑ZJU、植物乳杆菌LP‑ZJU和乳酸片球菌PA‑ZJU，按照菌落形成单位数目之比为2:5:3复合，进行浓缩并冷冻干燥，加入适量麦芽糊精而制成。将复合益生菌稀释后，使用喂食器经口灌胃1日龄哺乳仔猪和/或29日龄仔猪（26日龄断奶）1次，使每头仔猪灌喂活菌数达到1010 CFU。本发明提供的复合益生菌能够显著降低仔猪断奶后的腹泻率，显著提高猪保育期平均日增重，料重比也有降低的趋势。此外复合益生菌也能显著降低仔猪第25天粪便中的促炎因子和钙卫蛋白水平，显著提升仔猪第25天粪便中的抑炎因子水平，提示复合益生菌能降低肠道炎症水平，改善肠道健康。

公开(公告)号：CN116534890A

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202310451501.0

申请日：2023-04-25

Applicant: 山西浙大新材料与化工研究院 ,  浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  苏维发 ,  路则庆 ,  李治学 ,  靳明亮 ,  王凤芹

IPC: C01G9/02 ,  A01K67/02

Abstract: 本发明公开了一种饲料级氧化锌的制备及其在断奶仔猪上的应用。采用碱式碳酸锌作为制备原料，根据碱式碳酸锌的热重分析得到最佳煅烧温度250~300℃，将碱式碳酸锌在马弗炉中煅烧2 h，制备得到饲料级新型氧化锌。该方法制备工艺简单，制备得到新型氧化锌比表面积48.9 m2/g、粒径10~30μm。制备得到的新型氧化锌在人工胃液中不易被分解，对大肠杆菌K88、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有更好的抗菌活性，对猪小肠上皮细胞IPEC‑1具有更低的细胞毒性。将低剂量新型氧化锌和益生菌配伍可有效降低断奶仔猪腹泻率、促进断奶仔猪生长、提高养分表观消化率、减少锌排放，改善肠道屏障和免疫功能，提高肠道有益菌的丰度。

公开(公告)号：CN116286496A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310132121.0

申请日：2023-02-19

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  何欢 ,  杨铭志 ,  都帅 ,  姜子鹏 ,  开丽霞 ,  靳明亮 ,  路则庆 ,  王凤芹

IPC: C12N1/20 ,  A23K10/18 ,  A23K50/60 ,  A23K50/30 ,  A23K20/163 ,  C12R1/25 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种降低断奶仔猪腹泻的复合益生菌及其应用。所述复合益生菌由婴儿双歧杆菌BI‑ZJU、植物乳杆菌LP‑ZJU和乳酸片球菌PA‑ZJU，按照菌落形成单位数目之比为2:5:3复合，进行浓缩并冷冻干燥，加入适量麦芽糊精而制成。将复合益生菌稀释后，使用喂食器经口灌胃1日龄哺乳仔猪和/或29日龄仔猪（26日龄断奶）1次，使每头仔猪灌喂活菌数达到1010 CFU。本发明提供的复合益生菌能够显著降低仔猪断奶后的腹泻率，显著提高猪保育期平均日增重，料重比也有降低的趋势。此外复合益生菌也能显著降低仔猪第25天粪便中的促炎因子和钙卫蛋白水平，显著提升仔猪第25天粪便中的抑炎因子水平，提示复合益生菌能降低肠道炎症水平，改善肠道健康。

公开(公告)号：CN115976092A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202210822576.0

申请日：2022-07-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  文超越 ,  张红 ,  靳明亮 ,  王凤芹

IPC: C12N15/75 ,  C12N15/12 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌自分泌表达外源蛋白的方法。通过构建KR32枯草芽孢杆菌分泌表达载体，实现无需添加外源诱导剂，即可实现分泌表达KR32；用重组表达得到的含抗菌肽KR32的上清液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等均有显著的抑制作用。本发明为在枯草芽孢杆菌表达系统中自分泌重组表达抗菌肽提供了可能；自分泌表达直接分泌至胞外，无需经过外源诱导剂诱导，避免了诱导剂的毒性，同时省去了诱导剂成本；同时直接分泌表达对宿主的生长无明显抑制作用。使用液质联用技术对枯草芽孢杆菌分泌的KR32进行检测，能够检测到目标物的峰。对21日龄仔猪灌胃该菌14天，后连续进行3天K88灌胃攻毒（1*1010 cfu/d）发现其能够显著抵御大肠杆菌k88。

公开(公告)号：CN114686395A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202111405935.4

申请日：2021-11-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  程远之 ,  杜满 ,  颜溶 ,  曹进平 ,  王凤芹 ,  路则庆

IPC: C12N1/20 ,  C12P3/00 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开一种枯草芽孢杆菌及应用其产纳米硒的方法。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisSR41，于2021年10月11日保藏，保藏编号：CGMCC No.23536，具有高效还原亚硒酸钠并生成纳米硒的能力。枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis SR41富硒发酵后可得到枯草芽孢杆菌及纳米硒的复合物，可进一步提取其中的纳米硒，即枯草芽孢杆菌产纳米硒。本发明首次公开了仅需超声破碎即可提取枯草芽孢杆菌产纳米硒的制备方法，所提取的纳米硒平均粒径为65.07±2.39nm，与现有的低速离心法或正己烷萃取并离心法等纳米硒提取方法相比，所得纳米硒粒径更低，且操作更为简单。同时，本发明公开了所述的枯草芽孢杆菌产纳米硒具有缓解细胞氧化应激的功能，提示其具有较好的抗氧化能力。

公开(公告)号：CN113583956B

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202110853165.3

申请日：2021-07-27

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  程远之 ,  肖肖 ,  宗鑫 ,  王凤芹 ,  路则庆 ,  靳明亮

IPC: C12N5/0786 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种细胞焦亡模型的构建方法及其应用。细胞焦亡模型的构建方法，包括以下步骤：1）病原菌活化；2）活化的病原菌处理细胞；3）细胞样品收集与构建效果检测；所述的病原菌为大肠杆菌K88，处理细胞所用的浓度为OD600=0.4~0.6，含活菌数为1~3×107CFU/mL，处理细胞2小时后加入终浓度为2 mM的三甲基腺苷ATP，处理时间共计2.5小时；所述的细胞为鼠源单核巨噬细胞J774A.1。应用到小鼠，包括1）大肠杆菌K88活化；2）活化菌液灌胃小鼠；3）小鼠样品收集与构建效果检测。本发明贴近实际生产，效果与LPS相当，且极大地降低了使用成本。本发明为后续探究细胞焦亡在机体抵御病原菌感染过程中发挥的作用及其机制提供了依据，并为治疗常见的病原菌感染奠定了基础。

公开(公告)号：CN110140810B

公开(公告)日：2022-03-15

申请号：CN201910436143.X

申请日：2019-05-23

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王成 ,  苏维发 ,  姜子鹏 ,  郝丽红 ,  张煜 ,  路则庆 ,  王凤芹

IPC: A23K10/38 ,  A23K10/12

Abstract: 本发明公开了一种饲用发酵黄酒糟的制备方法及其发酵黄酒糟。1）配制发酵原料；2）配制培养基；活化发酵种子液，将枯草芽孢杆菌：戊糖片球菌按1:1～1:1.5混合并接种；3）装袋发酵，3‑4天后即可使用。本发明可以显著地降低黄酒糟中抗性淀粉和纤维含量，提高粗蛋白，小肽，益生菌和有机酸的含量，并提高黄酒糟的猪仿生消化率，具有较好的应用前景。