公开(公告)号：CN118957019A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411037300.7

申请日：2024-07-30

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 朱静 ,  郭志涛 ,  孟祥宁 ,  孙文靖

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明提出了一种提取细胞外泌体eccDNA的方法。所述的方法包括细胞外泌体提取、细胞外泌体DNA提取、外泌体eccDNA分离与纯化以及外泌体eccDNA扩增的步骤。本发明成功建立了提取细胞外泌体eccDNA的流程，并对获得的外泌体eccDNA进行了分子特征分析。通过测序分析表明，外泌体eccDNA的分子大小、GC含量等特征与已报道的eccDNA相关特征相吻合，并且三次实验之间具有较好的重复性，证明其分子结构符合经典eccDNA的分子特征，同时外泌体eccDNA具有一定的特异性。本发明的提出为开展外泌体eccDNA相关的结构特征、潜在功能、潜在生物标志物开发等研究提供了技术手段。

公开(公告)号：CN109593760B

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN201811203594.0

申请日：2018-10-16

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 孟祥宁 ,  蔡梦迪 ,  吕雅凡 ,  朱静 ,  关荣伟 ,  高巍 ,  马金法 ,  王萍 ,  王旭 ,  宋盈 ,  张慧姝 ,  韩玥

IPC: C12N15/113 ,  A61K31/519 ,  A61K31/7105 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了一种与肿瘤细胞MTX耐药性相关的circRNA及其在逆转肿瘤细胞对MTX耐药中的应用。本发明选取HT‑29 MTX敏感及含DMs的MTX耐药细胞系作为研究对象，通过二代测序、验证及优选，获得在MTX耐药细胞中高表达的circRNA，命名为circRNA7746，通过建立荷瘤小鼠的MTX治疗模型结合PCR及琼脂糖凝胶电泳方法，进一步确定了circRNA7746的表达量与肿瘤细胞对氨甲蝶呤(MTX)耐药性程度正相关。利用病毒转染方法分别检测了干扰circRNA7746对细胞耐药性、DHFR基因的扩增程度及扩增形式及微核外排的影响，确定了抑制circRNA7746可以促进DMs外排，逆转肿瘤细胞对MTX耐药。本发明的提出为肿瘤治疗提供新的靶点，为有效地对抗MTX耐药提供了有效技术手段。

公开(公告)号：CN104946755B

公开(公告)日：2017-07-11

申请号：CN201510319265.2

申请日：2015-06-11

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 孟祥宁 ,  蔡梦迪 ,  李春香 ,  朱静 ,  刘鹏 ,  高巍 ,  关荣伟 ,  侯丽青

IPC: C12Q1/68 ,  G01N33/573

Abstract: 本发明涉及BRCA1蛋白在制备逆转肿瘤细胞对MTX耐药性的药物中的应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。本发明在已建立的MTX耐药细胞进化模型中，选取含DMs的耐药细胞为研究对象，通过确定BRCA1蛋白在HT29含DMs的耐药细胞中的高表达，进一步探讨BRCA1蛋白及其所在通路与含有DHFR耐药基因的双微体稳定存在的关系。本发明利用脂质体转染方法构建了稳定干扰BRCA1的HT29MTX耐药克隆，并利用Western Blot，FISH，Real‑time PCR，MTT和免疫荧光等方法，分别检测了干扰BRCA1对细胞耐药性、DHFR基因的扩增程度及扩增形式、DNA双链断裂及双链断裂修复途径、细胞周期及微核外排的影响。从而确定抑制BRCA1蛋白可以促进DMs外排，逆转肿瘤细胞对MTX耐药。

公开(公告)号：CN102586414A

公开(公告)日：2012-07-18

申请号：CN201110340841.3

申请日：2011-11-02

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 傅松滨 ,  于旸 ,  朱静 ,  孟祥宁 ,  孙文靖 ,  张春玉

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供了一种人卵巢癌细胞系UACC-1598中双微体序列测定方法，一、人卵巢癌细胞UACC-1598的培养及细胞完整双微体的脉冲场凝胶电泳分离；二、将获得的卵巢癌细胞系UACC-1598的双微体，应用Roche公司454技术对人卵巢癌细胞系UACC-1598中双微体序列进行测定。本发明脉冲分离出来的高纯度DMs很大程度上保证了实验对象的完整性，由于双微体序列的异质性的存在，同时重复性较高，并且总大小只有几十兆碱基的特点，更适合采用Roche的454高通量测序技术进行分析，从而实现对其序列全貌及特征的全面认识，很大程度上保证了所得序列的真实性。

公开(公告)号：CN109200288B

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN201811074653.9

申请日：2018-09-14

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 孟祥宁 ,  王旭 ,  蔡梦迪 ,  朱静 ,  关荣伟 ,  高巍 ,  马金法 ,  王萍 ,  周静 ,  张涵威 ,  于森 ,  陈思宇

IPC: A61K45/00 ,  A61K31/7088 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了MSH3蛋白抑制剂在制备逆转MTX耐药肿瘤细胞耐药性的药物中的应用，属于医药技术领域。本发明针对MTX耐药且DHFR基因高度扩增的恶性肿瘤细胞，以MSH3为靶点，降低基因扩增程度，消减细胞内的DMs和HSR，同时，干扰MSH3可抑制HR、NHEJ和A‑EJ对DSBs的修复作用从而逆转肿瘤耐药，提高肿瘤治疗的效率。本发明为MTX作为主要治疗药物且易产生耐药性的恶性肿瘤的生物治疗提供新的靶向性治疗方案，为有效地对抗MTX耐药提供了科学的依据。此外，本发明对于深入了解化疗耐药的本质以及寻找个体化治疗的耐药靶点也具有非常积极的意义。

公开(公告)号：CN112458104A

公开(公告)日：2021-03-09

申请号：CN202011417022.X

申请日：2020-12-04

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 孙文靖 ,  吴杰 ,  秦倩 ,  徐丽丹 ,  计薇 ,  黄昀 ,  朱静

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/54 ,  C12N9/16 ,  C12N9/12 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6883

Abstract: 本发明公开了一种与非综合征型唇腭裂相关的突变的N4BP2基因及其应用，所述突变后的N4BP2基因相较于Gene bank登录号为NM_018177.6的未突变的N4BP2基因，分别在第13外显子含有一个非移码缺失突变位点4:40133481‑40133489delAAGATATTT、在第9外显子含有一个错义突变位点4:40123905T>G和一个错义突变位点4:40122958C>T，该突变的N4BP2基因可用于制备检测非综合征型唇腭裂疾病诊断试剂盒。该突变位点的发现可以对其家系后代进行优生优育指导，并可以作为非综合征型唇腭裂这种遗传病的携带者筛查和产前诊断筛查位点，用于群体的优生优育的指导。

公开(公告)号：CN103301447B

公开(公告)日：2014-12-31

申请号：CN201310256088.9

申请日：2013-06-25

Applicant: 哈尔滨医科大学

Inventor： 傅松滨 ,  孟祥宁 ,  朱静 ,  李春香 ,  齐秀英 ,  孙文靖 ,  张惠姝

IPC: A61K38/45 ,  A61P35/00 ,  A61K31/519

Abstract: 本发明涉及DNA-PKcs在制备影响DHFR基因扩增改变肿瘤细胞对MTX耐药性的药物中的应用，属于生物医药。本发明通过建立MTX耐药细胞进化模型，选取低浓度耐药（HSRs）和高浓度耐药（DMs）细胞为研究对象,检测亲本细胞及耐药细胞中的基因扩增程度和形式、DNA损伤情况及DNA-PKcs的表达情况，进而针对NHEJ途径的核心蛋白DNA-PKcs，在MTX耐药细胞中建立稳定干扰DNA-PKcs的克隆，检测稳定干扰克隆之中DHFR基因的扩增程度和扩增形式、细胞的生长、凋亡和耐药性的变化。