一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法

    公开(公告)号:CN105567756A

    公开(公告)日:2016-05-11

    申请号:CN201610069548.0

    申请日:2016-02-01

    Applicant: 厦门大学

    CPC classification number: C12P13/001

    Abstract: 本发明公开了一种海洋菌株及其胺脱氢酶催化制备手性胺的方法,属于生物法不对称合成手性化合物技术领域。本发明筛选得到来源于海洋的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica),在加入底物酮、氨基供体和辅助底物情况下,利用该菌株的全细胞及粗酶液催化酮不对称还原胺化制备手性胺。本发明确定了该菌株全细胞催化和粗酶液催化的不对称还原胺化的反应体系和反应条件。本发明在生物催化制备手性胺领域具有较好的工业应用前景,对于今后海洋新型生物催化剂的开发和手性胺的绿色合成方法的研究具有重要意义。

    一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用

    公开(公告)号:CN102965323A

    公开(公告)日:2013-03-13

    申请号:CN201210568673.8

    申请日:2012-12-24

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用,涉及1,3-丙二醇。提供丁酸梭菌(Clostridium butyricum)Gen160以及利用废甘油生产1,3-丙二醇的菌株筛选方法与应用。步骤为取采集样品加入到白菜汁中,富集培养后置水浴,杀死非芽孢菌,转入梭菌增殖液体培养基,厌氧培养再置水浴,转入发酵培养基,厌氧选择性富集培养后进行高效液相色谱分析发酵产物,选取能生产1,3-丙二醇的阳性菌;采用高层琼脂柱法分离出单菌落;进行好氧和厌氧培养,除去兼性厌氧菌,得到严格厌氧菌,分析发酵产物,选取能够生产1,3-丙二醇和培养特征、菌落形态均符合丁酸梭菌培养特征的菌株进行16S rDNA序列分析鉴定。

    一种构建辅酶氧化酶基因与脱氢酶类基因融合的方法和应用

    公开(公告)号:CN102732488A

    公开(公告)日:2012-10-17

    申请号:CN201210220691.7

    申请日:2012-06-28

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 周强 王静

    Abstract: 一种构建辅酶氧化酶基因与脱氢酶类基因融合的方法和应用,涉及一种基因工程、生物催化与生物转化。运用重叠延伸PCR技术,将辅酶氧化酶基因与甘油脱氢酶基因融合在一起,形成一个开放阅读框,并构建原核表达系统BL21-pET32a-gdh-nox。利用全细胞催化技术,合成目的产物。所述辅酶氧化酶基因与脱氢酶类基因融合,在制备由脱氢酶类催化合成目的产物中的应用。利用基因融合技术,克服了脱氢酶类在催化反应时由于辅因子的不断消耗而带来目的产物得率下降的难点,从而大大提高目的产物得率,而且同时利用全细胞催化技术,稳定性好,也可使目的产物易于分离纯化,降低工业生产成本。

    一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法

    公开(公告)号:CN102703574A

    公开(公告)日:2012-10-03

    申请号:CN201210190270.4

    申请日:2012-06-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,涉及一种氧化还原酶。提供一种效率较高、可增大发现有实际应用价值酶的概率,以克服现有的筛选手段实用性不高、资源浪费较大、效率较低等缺陷的筛选辅酶依赖型氧化还原酶的方法,所述辅酶依赖型氧化还原酶包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸依赖型氧化还原酶。建立NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶库;对所述氧化还原酶,依据其反应条件进行分类;对每一类氧化还原酶通过实验统一其反应条件,建立对应的氧化还原酶系的检测平台;建立菌株库;利用检测平台对菌株库进行高通量酶活检测,筛选得NAD(H)和NADP(H)依赖型氧化还原酶。

    一种转化甘油制备乳酸的方法

    公开(公告)号:CN102250811A

    公开(公告)日:2011-11-23

    申请号:CN201110198853.7

    申请日:2011-07-15

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 赵耿

    Abstract: 一种转化甘油制备乳酸的方法,涉及一种乳酸。提供一种制备乳酸的菌种戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)R3-8。将戊糖乳杆菌R3-8接入含有甘油的种子培养基中培养,将种子液加入发酵培养基中微氧发酵,发酵过程中通入空气搅拌,流加废甘油,同时流加6~8M碱溶液,控制pH值为5.0~7.0,发酵过程中测定菌体干重浓度、甘油和乳酸浓度,当菌体干重浓度低于1.5g/l时,停止流加甘油,结束发酵。发酵培养基无需进行灭菌,直接用于发酵;所用菌种为益生菌,无生物安全性方面的隐患;减少了能耗,降低了生产成本。

    一种检测人血清中肿瘤标志物的微流控芯片

    公开(公告)号:CN111323584A

    公开(公告)日:2020-06-23

    申请号:CN201911086569.3

    申请日:2019-11-08

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 本发明公开了一种检测人血清中肿瘤标志物的微流控芯片,基于适配体技术,具有至少一检测通道,该检测通道包括依次连通的一连通进样装置的可开闭的进样孔、一孵育腔室和一检测腔室。本发明使用微流控技术建立一套全自动化的肿瘤标志物检测体系,可大大降低肿瘤癌症早期初筛实验室对于场地的要求,将原本需要的4-5个相连而又独立的实验室群缩小为一个实验室台面。

    一种利用活性包涵体制备光学纯L-叔亮氨酸的方法

    公开(公告)号:CN107858384A

    公开(公告)日:2018-03-30

    申请号:CN201711094066.1

    申请日:2017-11-08

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 张永辉

    Abstract: 本发明公开了一种利用活性包涵体制备光学纯L-叔亮氨酸的方法,包括如下步骤:(1)制备双功能酶活性包涵体,该双功能酶活性包涵体的活性成分为一融合双功能酶,该融合双功能酶包括通过连接肽相连的一亮氨酸脱氢酶(leucine dehydrogenase,LeuDH)部和一用于辅酶NAD+再生的多聚酶部;(2)将上述双功能酶活性包涵体加入pH 6.0~10.0的反应混合液重悬,然后于20~40℃反应,反应期间控制pH为6.0~10.0;所述反应混合液包含50~1000mM三甲基丙酮酸、50-1000mM甲酸铵和0.05~5mM的辅酶NAD+。

    一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法

    公开(公告)号:CN105063010A

    公开(公告)日:2015-11-18

    申请号:CN201510465185.8

    申请日:2015-07-31

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种聚乙烯亚胺金属配位固定化的多酶体系及其制备方法,属于固定化酶技术领域,利用聚乙烯亚胺与金属离子配位固定甘油脱氢酶、辅酶氧化酶,以及甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶,在固定化过程中聚乙烯亚胺分子通过亚胺与金属离子的配位作用,形成网状的聚乙烯亚胺骨架,配位在聚乙烯亚胺上的金属离子与甘油脱氢酶、辅酶氧化酶的C端组氨酸标签,以及甘油脱氢酶-辅酶氧化酶融合酶的C端组氨酸标签形成配位键,获得固定化多酶体系。金属离子在固定化过程中起配位交联作用,并可提高多酶体系的催化效率。本发明的优点在于多酶耦联效率高、制备条件温和、工艺简单易行。所得固定化酶具有固定化率高,活性回收率高,能够明显提高温度稳定性、重复使用稳定性好等优点。

    一种1,3-丙二醇的制备方法
    20.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102776245B

    公开(公告)日:2015-05-13

    申请号:CN201210262830.2

    申请日:2012-07-27

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 方柏山 池帅

    Abstract: 一种1,3-丙二醇的制备方法,涉及一种化工原料。构建生物砖元件dhaT,再构建生物砖元件T7 promoter-RBS-dhaT-TT,然后构建组基因环路装置T7-RBS1.0-dhaB-TT-T7-RBS1.0-yqhD-TT-T7-RBS1.0-dhaT-TT,再发酵培养。利用合成生物学技术快速、高效构建甘油转化1,3-丙二醇的基因环路装置库,并可广泛应用于合成生物学中标准模块和元件的组合与拼装。此外,基因环路解决了NADH单一还原力瓶颈问题,达到NADH和NADPH辅酶并用的效果,优化甘油转化为1,3-丙二醇的合成生物系统,提高1,3-丙二醇产量和得率。

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