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公开(公告)号：CN102559681B
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201210017566.6
申请日：2012-01-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , C12N5/10 , A01H5/00
Abstract: 本发明公开了一种杨树下胚轴特异表达启动子ProWOX11b及其应用。启动子ProWOX11b的核苷酸序列如SEQNO1所示。本发明以南林895杨DNA为材料，采用锚定PCR、反向PCR、TAIL-PCR基因克隆的方法，经过三次步移，克隆得到杨树下胚轴特异表达启动子ProWOX11b序列。采用通路克隆技术构建植物启动子表达载体pBGGUS-ProWOX11b，该启动子序列后接GUS报告基因，在启动子ProWOX11b的驱动下，报告基因GUS可在植物下胚轴特异表达。因此，应用本发明提供的启动子，可以在植物基因工程中，诱导相应目的基因在下胚轴特异表达，改良优良品种选育进程。
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公开(公告)号：CN102860260A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201210383383.6
申请日：2012-10-11
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种柳杉组织培养快速繁殖方法，包括：取柳杉外植体茎段，接种于诱导不定芽培养基DCR＋0.1~2.0mg/L6-BA＋0.1~2.0mg/LIBA＋0.5~5.0g/LAC＋0.001~0.01mg/LTDZ+30g/L蔗糖，诱导培养产生不定芽；生根培养采用两阶段发根，即先放入生根培养基1为：1/2DCR＋0.1~2.0mg/LNAA＋0.1~2.0mg/LIBA+0.1~1.0mg/L6-BA+1.0~10.0g/LAC＋10.0~30.0g/L蔗糖，先进行2~15d暗培养后，放入光照下培养5~30d后，转接于生根培养基2为：DCR+0.1~1.0mg/LNAA＋0.1~1.0mg/L6-BA+0.5~5.0g/LAC+30.0g/L蔗糖。通过本方法，嫩芽增殖系数达到5.7以上，生根率为80%以上。培养周期短，繁殖量大，有利于规模化生产。
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公开(公告)号：CN111944885B
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202010375167.1
申请日：2020-05-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种马尾松miRNA前体基因的克隆方法，属于植物分子生物学领域。本发明提供的马尾松miRNA前体基因的克隆方法，分别对miRNA前体基因的PCR扩增体系和PCR反应条件进行优化，退火温度控制在64‑68℃，循环次数为34‑35次，以及改变琼脂糖凝胶电泳的胶浓度、电压和电泳时间，实现成功高效地克隆马尾松miR172和miR947前体基因。本发明方法特异性强，目的基因的产量高，在前体基因的关键成熟序列区域无碱基错配现象，获得的前体基因序列与目的基因序列同源性高达100％。有利于进一步构建植物表达载体，用于转基因植物的培育，在农林作物遗传改良和分子育种方面具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN106967731B
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201710359117.2
申请日：2017-05-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/82 , C07K14/415 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种柽柳盐胁迫响应关键基因TcARF6及其应用，关键基因TcARF6的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。柽柳盐胁迫响应关键基因TcARF6的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以柽柳盐胁迫处理的柽柳为材料，通过RACE技术克隆了TcARF6基因。通过实时荧光定量检测技术，检测TcARF6基因在柽柳受到胁迫后的表达模式，验证其响应胁迫的关键性。同时，采用gateway技术构建其柽柳过量表达载体pH35GS‑TcARF6，在启动子P35GS的驱动下，TcARF6可在转基因内高效表达。盐胁迫响应过程中的TcARF6相对定量，表明TcARF6只在根中特异性迅速下调表达，验证了该基因在胁迫响应中关键作用，在林木转抗性育种领域有重要应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108384885B
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201810504433.9
申请日：2018-05-23
Applicant: 江西省科学院生物资源研究所 , 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种香樟SSR引物组合物及其品种鉴定方法，用于香樟品种的快速分子检测与鉴定，属于植物新品种分子鉴定领域。本发明设计了4对SSR引物，并利用它们成功构建了11个香樟品种指纹图谱，可快速、准确地区分各香樟品种。本发明基于4对SSR引物，进行一次PCR扩增反应，利用8％聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，利用引物组合法，可直接根据产物的片段进行判断。本发明可直接应用于香樟不同品种的分子鉴定，具有很好的实用性。
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公开(公告)号：CN110499278A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910915380.4
申请日：2019-09-25
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法，包括以下步骤：首先通过组合酶解液酶解银杏叶，得到银杏的原生质体；然后对得到的银杏原生质体进行分离、纯化，并且进行预处理，再利用PEG介导法将携带绿色荧光蛋白eGFP标签的p2FGW7.0质粒载体转入银杏原生质体中，经过培养，使其在银杏原生质体中表达。本发明构建得到银杏叶原生质体瞬时表达系统，操作简单易行，可以获得大量、完整、纯净的银杏叶原生质体，不受季节和地点的限制。本发明适用于银杏实生苗，利用幼嫩的叶即可得到较高质量的原生质体，原生质体活力可达90％，同时对于野外的成熟叶组织在一定程度上也适用。
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公开(公告)号：CN110184278A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910468211.0
申请日：2019-05-30
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/00
Abstract: 本发明公开了一种柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2及其miRNA抗性靶标rTcNAC2和应用。所述的柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明通过大引物突变技术将TcNAC2基因的miR164响应元件同义突变，获得了miR164抗性靶标rTcNAC2，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。在盐胁迫下，TcNAC2受miR164的转录后调控，而rTcNAC2则不受其调控。柽柳盐胁迫响应基因TcNAC2及其miR164抗性靶标rTcNAC2在植物耐盐性或林木抗性育种领域的研究和应用中有重要价值。
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公开(公告)号：CN109082429A
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201811018873.X
申请日：2018-08-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种杨树不定根和木质部发育的关键基因PeRBR及其表达蛋白和应用，该关键基因PeRBR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过将PeRBR基因转入杨树，过量表达PeRBR基因的转基因杨树不定根长度增加、侧根数目增多，而且不定根和茎的木质部厚度都明显增加。这表明PeRBR基因是杨树不定根和木质部发育的关键调节因子，在林木无性系育种和提高木材产量等方面有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN104946664B
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201510360679.X
申请日：2015-06-26
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种杨树耐盐有关基因PeHKT1及其表达蛋白和应用，该杨树耐盐重要基因PeHKT1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该杨树耐盐重要基因PeHKT1的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以南林895杨初生不定根为材料，通过RACE技术克隆了PeHKT1基因。同时，采用通路克隆技术构建其杨树过量表达载体pH35GS‑PeHKT1，该基因位于启动子P35S之后，在启动子P35S的驱动下，PeHKT1可在杨树体内高效表达，从而可提高杨树的抗盐性，所以PeHKT1基因是杨树响应盐胁迫的重要基因，在林木基因工程领域有重要应用价值。
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