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公开(公告)号：CN118931957A
公开(公告)日：2024-11-12
申请号：CN202411227625.1
申请日：2024-09-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本申请公开了一种低浓度农杆菌介导的湿地松遗传转化方法，涉及植物基因工程技术领域。本申请的低浓度农杆菌介导的湿地松遗传转化方法，采集湿地松球果表面消毒后，取出种子内完整的雌配子体并诱导培养出胚性愈伤组织，以发育至PEMⅢ阶段的湿地松胚性愈伤组织为材料，进行悬浮预培养获得受体材料，使用OD600值为0.3以下的农杆菌侵染液进行侵染，侵染结束后进行共培养、恢复培养、筛选培养、成熟处理后，最终获得转基因的体细胞胚。本方法侵染后的转化效率多达0.71块/g，且阳性率不低于42.86％，说明该体系稳定且效率较高，为湿地松的基因功能和品质改良研究提供技术支持，同时为培育高产、高抗的湿地松新品种奠定基础。
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公开(公告)号：CN118063561A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202311849936.7
申请日：2023-12-29
Applicant: 南京林业大学
IPC: C07K14/005 , C07K1/14
Abstract: 本发明公开了一种提取松材线虫体内病毒颗粒的方法，属于松材线虫体内病毒技术领域。该方法先培养松材线虫，收集线虫液，将线虫液浸泡在抗生素混合液中，离心清洗后冷冻，解冻后加入细胞裂解液和Rnasin，再次冷冻，解冻后研磨成匀浆，过滤，在滤液中加入PEG后冷冻，解冻离心，加入STE缓冲液溶解沉淀，然后用蔗糖密度梯度超速离心，收集各分层液去蔗糖，然后放置在透射电镜下观察，即可确定松材线虫体内病毒颗粒。本发明减少了松材线虫伴生微生物对提取过程造成的影响，减少了反复冻融次数，缩短了提取时间，提高了提取过程的稳定性以及病毒颗粒提取效率，所获得的病毒颗粒是反复冻融法获得的2倍以上。
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公开(公告)号：CN109924129A
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201910292853.X
申请日：2019-04-11
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种评价松树愈伤组织对松材线虫抗性的方法，其特征在于，利用无菌松材线虫对所诱导的松树胚性细胞系进行接种，通过愈伤组织外观形态变化、TTC细胞化学染色结果、线虫种群增长速率，比较不同细胞系对松材线虫的响应，从而筛选出抗性细胞系，淘汰敏感细胞系，实现在愈伤组织阶段就对松树胚性细胞的抗松材线虫特性进行早期评价。本发明利用无菌松材线虫对所诱导的松树胚性细胞系进行接种，通过愈伤组织外观形态变化、TTC细胞化学染色结果、线虫种群增长速率，比较不同细胞系对松材线虫的响应，从而筛选出抗性细胞系，淘汰敏感细胞系，在愈伤组织阶段就对其抗松材线虫特性进行早期评价，是一种简便、快速的愈伤组织抗松材线虫特性评价方法。
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公开(公告)号：CN106718889B
公开(公告)日：2018-09-25
申请号：CN201611089724.3
申请日：2016-12-01
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种高同步化的抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括胚性愈伤组织的诱导、增殖，体细胞胚的成熟、萌发和转化；所述的体细胞胚的成熟培养采用液—固增殖‑固成熟方式进行。本发明的高同步化的抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生及植株再生方法，以抗松材线虫病赤松的未成熟合子胚为外植体，通过对抗病赤松未成熟合子胚已成功诱导获得的胚性愈伤组织进行体细胞胚成熟、萌发与植株再生等试验，成功获得了成熟的体细胞胚和再生植株，并移栽成活，在成熟培养基上产生体细胞胚的萌发率和植株转化率高，分别为67.2%和46.5%，为抗病赤松的大规模繁殖和工厂化生产提供了重要的科学依据和技术支撑。
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公开(公告)号：CN102577956A
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN201210039667.3
申请日：2012-02-21
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
CPC classification number: Y02A40/243 , Y02P60/40
Abstract: 本发明公开了一种黑松体细胞胚胎发生和植株再生方法，该方法采用未成熟合子胚诱导出胚性愈伤组织，经过维持与增殖、成熟阶段获得体细胞胚，再经过萌发阶段获得再生植株，最后进行再生植株的移栽。本发明的黑松体细胞胚胎发生和植株再生方法，繁殖率高，在成熟培养基上培养70d后，平均每培养皿成熟的体细胞胚达144~216个，体细胞胚萌发率为63.8%，植株转化率为43.5%。这样每年可以获得大量的体胚苗，为黑松体细胞胚发生与再生植株工厂化奠定基础，解决当前造林种苗紧缺的问题，具有很好的实用性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102084849B
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN201010550230.7
申请日：2010-11-19
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 本发明公开了一种制备无细菌松材线虫的方法。该制备无细菌松材线虫的方法包括：培养松材线虫；制备纯净松材线虫卵；用15%H2O2浸泡50-60min松材线虫卵；孵化松材线虫；培养松材线虫并进行无细菌鉴定，即制备出无细菌松材线虫。本发明的制备无细菌松材线虫的方法，利用松材线虫卵具有粘附于玻璃器皿上的特性，采用小培养皿进行卵的收集，进而用新配制的15%H2O2进行灭菌处理，获得无菌松材线虫卵，无菌卵孵化并在灰葡萄孢上大量繁殖后获得无细菌的松材线虫。在无菌条件下，用所获得的无细菌松材线虫对赤松无菌组织培养幼苗进行接种试验显示，无细菌松材线虫接种依然能使无菌苗发生萎蔫。表明采用该方法对松材线虫进行无细菌化并未使其失去致病性，是一种简易且成功的方法。
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公开(公告)号：CN101584297B
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN200810234834.3
申请日：2008-11-19
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种马尾松(Pinus massoniana)组织培养及再生植株瓶内菌根化方法，属于生物技术和现代林业技术领域。该方法以马尾松无菌苗顶芽为外植体，首先诱导产生大量生长健壮的丛生芽，进而诱导不定根发生，不定根诱导完成后，在无菌条件下，将具有肉眼可见不定根的植株转移至珍珠岩基质上，同时接种外生菌根真菌彩色豆马勃(Pisolithustinctorius)，于瓶内实现菌根化。菌根化改善了马尾松组培再生植株不定根根系的质量，使平均侧根数、平均根长大大提高。菌根化还使不定根的形态发生了很大变化，在不定根表面形成了由十多层菌丝紧密排列的菌套。通过本方法，马尾松丛生芽诱导率达95％，增殖率达430％，生根率达85％，移栽成活率由65％提高到85％以上。
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公开(公告)号：CN101485291B
公开(公告)日：2011-08-24
申请号：CN200810019270.1
申请日：2008-01-18
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 一种赤松组织培养增殖方法，该方法以赤松无菌幼苗子叶节(含子叶及刚萌动的上胚轴和6～8mm下胚轴)为外植体，接种于GD+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L培养基中诱导子叶基部产生丛生芽；4～5周后将外植体连同已分化的丛生芽转入添加活性炭或NAA的培养基中促进芽的伸长；待丛生芽长达1.5～2.0cm时将其分别单个切下，并切割成5～8mm小段，接种于GD+6-BA1.5～2.5mg/L+NAA 0.25mg/L培养基中进一步诱导丛生芽增殖。增殖的丛生芽经过培养伸长后可再用于新一轮增殖。采用本发明，丛生芽增殖系数达3.5～4.6，一粒种子2年后可增殖出2～3万株可用于生根的组培苗。
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公开(公告)号：CN116064564B
公开(公告)日：2025-02-11
申请号：CN202210786625.X
申请日：2022-07-06
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种春兰CgARF4基因及其应用，CgARF4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明从春兰栽培品种“宋梅”中克隆获得CgARF4的基因序列，并在春兰中进行表达分析，随后将其构建至过表达载体导入目的植物中验证其功能，发现过表达CgARF4基因的拟南芥花期提前，但果实部分不育，与野生型植株相比结实率降低，离体叶片在含有IAA的MS培养基上生根率显著提高、根长增加，叶片中内源激素IAA、GA、ABA含量降低，MeJA、BR含量增加，可见该基因在兰花及其它园艺植物的栽培和遗传改良中将有广泛的用途。
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公开(公告)号：CN119265234A
公开(公告)日：2025-01-07
申请号：CN202411220970.2
申请日：2024-09-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本申请公开了一种根癌农杆菌介导的马尾松遗传转化体系的构建方法，属于基因工程技术领域。本申请根癌农杆菌介导的马尾松遗传转化体系的构建方法，采集马尾松未成熟球果并诱导培养出胚性愈伤组织，以处于PEM III阶段的马尾松胚性愈伤组织为材料，进行悬浮预培养获得受体材料，再采用OD600值为0.2‑0.6的农杆菌侵染液进行侵染后经共培养、恢复培养和筛选培养，采用GUS进行组织化学染色并进行分子鉴定，获得转基因胚性愈伤组织，再经过成熟处理，最终获得转基因体细胞胚。本发明建立的马尾松遗传转化体系，转化性能稳定且转化阳性率高，当受体材料是基因型为1‑3‑5的马尾松胚性愈伤组织时，转化阳性率高达100％。
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