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公开(公告)号：CN115044596A
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202210715402.4
申请日：2022-06-23
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了利用蓝藻铁氧还蛋白Fd直观检测目的蛋白表达纯化的方法。首先构建目的蛋白基因与蓝藻fd基因或其同源基因的融合基因，并将含该融合基因的表达载体转入表达菌种中进行表达，通过观察表达菌液破碎后的上清液和/或其纯化组分的颜色来判断融合蛋白是否被成功表达和/或纯化，如果上清液和/或纯化组分呈现棕红色，说明目的蛋白与蓝藻Fd蛋白或其同源蛋白一起被表达和/或纯化。该方法实现了对目的蛋白表达纯化的直观检测，准确性高，方便快捷，大大节省了常规验证目的蛋白成功表达纯化的时间。
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公开(公告)号：CN113201067A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110410462.0
申请日：2021-04-16
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种快速提纯细胞色素b6f的方法，以蓝细菌为原料，破碎细胞获得类囊体膜，洗涤去除杂蛋白后，加入去垢剂十一烷基麦芽糖苷或十二烷基‑β‑D‑麦芽糖苷，采用三步硫酸铵沉淀法获得细胞色素b6f粗品，然后经蔗糖密度梯度离心和阴离子交换柱获得细胞色素b6f成品。与现有技术相比，本发明以生长速度快、培养简单的蓝细菌为原料提纯细胞色素b6f，提取率高，操作步骤少，耗时短，且获得的细胞色素b6f纯度高、均一性好。
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公开(公告)号：CN105165802B
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201510679735.6
申请日：2015-10-19
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一种冻存蓝细菌的方法，首先在固体培养基上培养出蓝细菌，然后将无菌试纸片平放在蓝细菌上面，粘起蓝细菌，接着将粘有蓝细菌的试纸片密封好，冻存于液氮中。该方法舍弃了冷冻保护剂，不需要进行慢速冷冻，使用普通试纸进行蓝细菌的直接液氮冷冻保存，整个流程操作简单，减少了冻存步骤，避免了细菌的污染，提高了冻存效率，而且冻存后细菌的复苏时间短，节约了成本。
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公开(公告)号：CN107287331A
公开(公告)日：2017-10-24
申请号：CN201710646653.0
申请日：2017-08-01
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种高效检测蓝藻细胞周期的方法，利用酰胺酶AmiC3或其同源蛋白和荧光蛋白的融合蛋白来标记蓝藻细胞分裂环，通过观测荧光显示的蓝藻细胞分裂环出现的状态来判断其细胞周期。本发明解决了目前蓝藻不能很好的进行细胞周期检测的技术问题，为研究蓝藻细胞分裂与分化的联系提供了一条途径，也为通过检测细胞周期来评定蓝藻的生长状态提供了一条便捷直观的方法。
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公开(公告)号：CN113201436A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110359526.9
申请日：2021-04-02
Applicant: 北京大学
IPC: C12M1/00
Abstract: 本发明公开了一种离心沉淀自动重悬器及重悬方法。所述重悬器由操纵杆和毛刷组成，其中所述操纵杆包括手柄、电机和连接杆，毛刷通过连接杆与手柄连接，电机安装在手柄内，由电机带动连接杆旋转，从而带动毛刷转动。使用时，在离心管中加入重悬所需溶液，然后使所述重悬器的毛刷接触沉淀，电机带动毛刷转动，使沉淀重悬混匀。本发明解决了长时间离心或超速离心后的沉淀样品较难重悬的问题，所述重悬器不仅节省了人力，更重要的是提高了沉淀重悬效率，还可避免对沉淀样品可能造成的污染。
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公开(公告)号：CN113046382A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN202110284596.2
申请日：2021-03-17
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公开了一步转化标记蓝藻染色体的方法和应用。本发明将四环素操纵子中的抑制蛋白TetR特异性与操纵DNA序列TetO相结合，通过一步遗传转化将TetR‑GFP融合蛋白及TetO×n序列阵列转到蓝藻基因组染色体上，然后利用启动子诱导TetR‑GFP融合蛋白的表达，表达后的TetR‑GFP融合蛋白与染色体上的TetO×n序列结合，最终得到染色体发绿色荧光的蓝藻阳性藻株，能够在荧光显微镜下观测到染色体的数目以及动态信息，从而可以将该染色体荧光标记藻株作为研究蓝藻染色体的复制和分离机制的一种理想材料。
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公开(公告)号：CN111424023B
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202010217326.5
申请日：2020-05-08
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明涉及一种酰胺酶类溶菌酶、所述酰胺酶类溶菌酶的表达载体以及表达系统，尤其涉及产酰胺酶类溶菌酶的蓝藻工程菌及其应用。采用本发明提供的蓝藻工程菌表达并纯化得到酰胺酶类溶菌酶，具有较高的抑菌活性以及酶解肽聚糖的活性，具有重要的医用抗菌、食品防腐、科研工具酶等价值。
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公开(公告)号：CN106191090A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610564902.7
申请日：2016-07-18
Applicant: 北京大学
Abstract: 本发明公布了一种无抗生素表达外源基因的蓝藻工程菌系统及其制备和应用。所述蓝藻工程菌表达系统包括：聚球藻PCC7002的△psbC突变体和整合载体，整合载体具有核心元件FlanKA—P1—MCS—P2—psbC—FlanKB，其中同源片段FlanKA和FlanKB能将P1—MCS—P2—psbC片段整合到聚球藻PCC7002内源质粒pAQ3的C0006和C0007的基因间区；外源基因插入到多克隆位点MCS中，由启动子P1调控表达；P2—psbC用来回复psbC基因缺失。本发明让蓝藻不用依赖抗生素培养压力来高效表达外源基因，不仅可大大降低利用蓝藻做生物反应器的成本，更可以减少因抗生素造成的环境污染和不安全性。
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公开(公告)号：CN102191241B
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201010119259.X
申请日：2010-03-05
Applicant: 北京大学
IPC: C12N15/11 , C12N15/63 , C12N1/21 , C07K14/195 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了产脂肪酸工程菌及其制备方法和应用。本发明提供的制备产脂肪酸工程菌的方法，是灭活淡水丝状蓝细菌Anabaena sp.PCC 7120中asr1131蛋白，得到产脂肪酸工程菌；所述asr1131蛋白的氨基酸序列如序列表的序列3所示。用所述方法制备得到的工程菌，细胞内的游离钙离子浓度升高，类囊体膜增多并充斥整个细胞，内膜组分多于野生菌，生长速度快于野生菌，总脂肪酸含量高于野生菌，很多重要脂肪酸含量也高于野生菌。
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