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公开(公告)号：CN117802275B
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202410231350.2
申请日：2024-03-01
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。
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公开(公告)号：CN117777283B
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410204796.6
申请日：2024-02-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , C07K14/15 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/68
Abstract: 一种牛白血病病毒p24蛋白的单克隆抗体及其应用，属于生物抗体技术领域。为解决目前现有技术尚缺乏针对BLV感染后p24抗体的商用化试剂盒的技术问题，本发明采用原核表达系统高效表达可溶性BLV p24蛋白，利用p24蛋白免疫BLAB/c小鼠后，采用杂交瘤技术制备针对p24蛋白的单克隆抗体，经鉴定该单抗效价高、反应原性良好、特异性强。此外，本发明不但检测出了单克隆抗体识别的抗原表位序列，而且还利用获得的单克隆抗体建立了检测BLV p24蛋白抗体的cELISA，该检测方法将是对现有检测gp51抗体cELISA方法的重要补充，也是当检测gp51抗体出现假阳性或假阴性时的一种特异、敏感的验证方法。
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公开(公告)号：CN117777283A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202410204796.6
申请日：2024-02-26
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , C07K14/15 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/68
Abstract: 一种牛白血病病毒p24蛋白的单克隆抗体及其应用，属于生物抗体技术领域。为解决目前现有技术尚缺乏针对BLV感染后p24抗体的商用化试剂盒的技术问题，本发明采用原核表达系统高效表达可溶性BLV p24蛋白，利用p24蛋白免疫BLAB/c小鼠后，采用杂交瘤技术制备针对p24蛋白的单克隆抗体，经鉴定该单抗效价高、反应原性良好、特异性强。此外，本发明不但检测出了单克隆抗体识别的抗原表位序列，而且还利用获得的单克隆抗体建立了检测BLV p24蛋白抗体的cELISA，该检测方法将是对现有检测gp51抗体cELISA方法的重要补充，也是当检测gp51抗体出现假阳性或假阴性时的一种特异、敏感的验证方法。
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公开(公告)号：CN116694578A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310482267.8
申请日：2023-04-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了稳定表达T7聚合酶细胞系、轮状病毒反向遗传系统及其构建方法和应用。本发明从新生犊牛腹泻粪便中分离获得两株牛轮状病毒分离株并进一步构建稳定表达T7RNA聚合酶的细胞系，其微生物保藏编号是：CGMCC No.45342；在此基础上建立了轮状病毒的反向遗传操作系统并拯救了牛轮状病毒分离株、疫苗株BLR株以及表达ZsGreen的报告病毒株，仅需构建牛轮状病毒株的全基因组的11质粒、不依赖辅助质粒即高效拯救病毒，拯救效率达100％。本发明应用所构建反向遗传操作系统对猴轮状病毒株、猪轮状病毒株和人轮状病毒株进行拯救，均能拯救获得相应的病毒，表明本发明建立的轮状病毒反向遗传系统具有毒株广谱性。
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