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公开(公告)号：CN114163506A
公开(公告)日：2022-03-11
申请号：CN202111318814.6
申请日：2021-11-09
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白在介导同源重组上的应用。本发明研究发现所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白影响DNA复制以及DNA损伤修复途径；本发明公开了施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白介导的大肠杆菌基因敲除技术的构建和应用。本发明首先构建施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白表达质粒和带有待敲除把基因序列左右同源臂序列的重组质粒；随后用两个质粒转化大肠杆菌，诱导双交换重组，通过表型筛选或PCR鉴定获得敲除靶基因的菌株。该操作系统首次构建基于PsPIWI‑RE蛋白与同源序列的基因编辑系统。为大肠杆菌等微生物的基因编辑提供新的优良工具。
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