布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法

    公开(公告)号:CN101633915A

    公开(公告)日:2010-01-27

    申请号:CN200910056686.5

    申请日:2009-08-20

    Abstract: 一种生物技术领域的酶的布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶的制备方法,具体步骤如下:分别设计引物,扩增布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶的α亚基和β亚基基因;将α亚基和β亚基基因分别克隆到原核表达载体pET21a(+)中,构建pET21a(+)-PheRSα及pET21a(+)-PheRSβ表达载体;将α亚基的操纵子亚克隆到pET21a(+)-PheRSβ中,形成重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ;将重组共表达载体pET21a(+)-PheRSαβ转化大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中,IPTG诱导表达;收集裂解后的菌液上清,纯化蛋白,得布氏锥虫苯丙氨酰tRNA合成酶。本发明构建布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶(PheRS)的重组质粒,表达纯化出布氏锥虫苯丙氨酸tRNA合成酶蛋白,为抗寄生虫药物的筛选奠定了基础。

    pHAb-FAST人源抗体表达载体系统及其使用方法

    公开(公告)号:CN104593416A

    公开(公告)日:2015-05-06

    申请号:CN201510053657.9

    申请日:2015-02-02

    Abstract: 本发明提供了一种pHAb-FAST人源抗体表达载体系统,包括pHAb-FAST 1载体和pHAb-FAST 2载体,所述pHAb-FAST 1载体包含依次排列的EF1α启动子,人抗体轻链信号肽序列和人抗体重链恒定区序列;所述pHAb-FAST 2载体包含依次排列的人抗体轻链恒定区序列、IRES序列和人抗体重链信号肽序列。运用本发明的所述表达载体系统,借助重叠PCR扩增技术,无需酶切连接过程,即可高效快速地获得具有表达功能的人源抗体表达载体;通过所获得的人源抗体表达载体可在哺乳动物细胞内高效表达全长抗体。

    杂交瘤细胞株及其制备方法

    公开(公告)号:CN101519649B

    公开(公告)日:2010-11-03

    申请号:CN200910045963.2

    申请日:2009-01-22

    Abstract: 一种生物技术领域的杂交瘤细胞株及其制备方法,制备杂交瘤细胞株具体为:表达hAG2蛋白;免疫小鼠;制备滋养细胞;制备小鼠脾细胞;将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞混合;细胞融合及培养;检测融合细胞,选取阳性杂交瘤细胞,反复克隆培养,得到杂交瘤细胞株,该杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC-C200902。用上述杂交瘤细胞注射小鼠,收集腹水,离心,收集上清液,纯化、鉴定即得hAG2单克隆抗体。本发明的杂交瘤细胞株可稳定、高分泌率地分泌hAG2单克隆抗体,本发明的hAG2单克隆抗体滴度达1×10-6,能与天然及变性的hAG2蛋白结合,且抗原表位位于hAG2蛋白的表面。

    P150SAL2启动子-荧光素酶真核表达载体及其制备方法

    公开(公告)号:CN102206669A

    公开(公告)日:2011-10-05

    申请号:CN201110107794.8

    申请日:2011-04-28

    Abstract: 本发明是一种P150SAL2启动子-荧光素酶真核表达载体及其制备方法。载体命名为p150Sal2-Luciferase表达载体,其中p150Sal2-luciferase片段全长2278bp,其中32~2313之间为p150Sal2promoter,2348~4000为luciferase阅读框。制备方法包括:设计引物,目的片段的克隆,扩增产物纯化,制备p150Sal2启动子荧光素酶真核表达载体。本发明能够有效、准确、灵敏、方便和快捷发现具有肿瘤抑制潜力的化合物。

    杂交瘤细胞株及其制备方法

    公开(公告)号:CN101519649A

    公开(公告)日:2009-09-02

    申请号:CN200910045963.2

    申请日:2009-01-22

    Abstract: 一种生物技术领域的杂交瘤细胞株及其制备方法,制备杂交瘤细胞株具体为:表达hAG2蛋白;免疫小鼠;制备滋养细胞;制备小鼠脾细胞;将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞混合;细胞融合及培养;检测融合细胞,选取阳性杂交瘤细胞,反复克隆培养,得到杂交瘤细胞株,该杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC-C200902。用上述杂交瘤细胞注射小鼠,收集腹水,离心,收集上清液,纯化、鉴定即得hAG2单克隆抗体。本发明的杂交瘤细胞株可稳定、高分泌率地分泌hAG2单克隆抗体,本发明的hAG2单克隆抗体滴度达1×10-6,能与天然及变性的hAG2蛋白结合,且抗原表位位于hAG2蛋白的表面。

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