公开(公告)号：CN118389685A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410557083.8

申请日：2024-05-07

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 宋萍 ,  赵海培 ,  沈虹雨

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供一种甲基化和基因突变同时放大检测的方法，所述方法包括以下步骤：S1：对待测核酸样本进行酶处理，使所述待测核酸样本中发生甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶；S2：设置反应体系，以步骤S1处理后的核酸样本为模板，加入特异性检测甲基化和基因突变的引物和协同信号放大的抑制探针；S3：进行qPCR反应，通过探针放大策略将突变模板、甲基化模板、或突变和甲基化模板扩增信号放大，实现甲基化和基因突变的同时放大检测。根据本发明方法，实现了在同一个体系中同模板以及不同模板上甲基化和基因突变的同时检测，通过探针放大策略实现了低丰度甲基化和基因突变的同时检测，具有提高的检测灵敏度，有效提高了基因检测的效率。

公开(公告)号：CN118256598A

公开(公告)日：2024-06-28

申请号：CN202410430118.1

申请日：2024-04-10

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 宋萍 ,  沈虹雨

IPC: C12Q1/6816

Abstract: 本发明公开一种基于CRISPR‑Cas12的单链核酸选择性切割方法，包括以下步骤：S1，设计并制备可激活CRISPR‑Cas12反式切割活性的Helper DNA；S2，设计引物，通过PCR将想要保留的单链DNA扩增成双链DNA以保留靶向单链DNA；S3，制备crRNA/Cas12预混液；S4，将该预混液与步骤S2中的溶液以及Helper DNA混合，利用CRISPR‑Cas12的反式切割活性实现选择性切割单链DNA。本发明方法操作简单，成本较低，分离周期短，可从低浓度的复杂单链DNA体系中精准捕获某一种或多种序列特异性ssDNA，且获得的ssDNA纯度较高，因此本发明具有良好的应用前景。