公开(公告)号：CN113999861B

公开(公告)日：2024-03-15

申请号：CN202111050778.X

申请日：2021-09-08

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  杨建林 ,  李舒月 ,  张浩

IPC: C12N15/35 ,  C12N15/70 ,  C07K14/015 ,  C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C07K1/22 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种腺相关病毒衣壳蛋白保守区多克隆抗体的制备方法及应用，通过DNAMAN软件分析，将AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10衣壳蛋白氨基酸序列中连续7个及以上氨基酸同源的序列依次拼接，获得的序列即为AAV衣壳蛋白保守区序列，与保守区氨基酸序列对应可确定编码衣壳蛋白保守区的DNA序列，根据宿主菌的特性，对获得的DNA序列进行密码子优化，将优化后的DNA序列合成并构建到pET‑30a原核表达载体，得到pET‑30a‑AAV‑RC保守区蛋白质粒，DNA序列如SEQ ID NO.1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2。成功制备了抗AAV衣壳保守区蛋白的多克隆抗体，识别所有血清型AAV，特异性识别和结合人真核细胞中转染表达的AAV衣壳蛋白。

公开(公告)号：CN114685651A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202210396426.8

申请日：2022-04-15

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN114685651B

公开(公告)日：2023-07-11

申请号：CN202210396426.8

申请日：2022-04-15

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN113999861A

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202111050778.X

申请日：2021-09-08

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  杨建林 ,  李舒月 ,  张浩

IPC: C12N15/35 ,  C12N15/70 ,  C07K14/015 ,  C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C07K1/22 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种腺相关病毒衣壳蛋白保守区多克隆抗体的制备方法及应用，通过DNAMAN软件分析，将AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10衣壳蛋白氨基酸序列中连续7个及以上氨基酸同源的序列依次拼接，获得的序列即为AAV衣壳蛋白保守区序列，与保守区氨基酸序列对应可确定编码衣壳蛋白保守区的DNA序列，根据宿主菌的特性，对获得的DNA序列进行密码子优化，将优化后的DNA序列合成并构建到pET‑30a原核表达载体，得到pET‑30a‑AAV‑RC保守区蛋白质粒，DNA序列如SEQ ID NO.1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2。成功制备了抗AAV衣壳保守区蛋白的多克隆抗体，识别所有血清型AAV，特异性识别和结合人真核细胞中转染表达的AAV衣壳蛋白。