本发明公开了ORF7b基因缺失的猫传染性腹膜炎减毒病毒及构建方法和应用，属于疫苗技术领域，本发明使用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术，在反向遗传操作平台的基础上，将质粒pBAC‑QS‑79S的ORF7b区域替换为Nanoluc序列，随后对毒株进行拯救，从而构建出ORF7b基因缺失减毒病毒。通过对该毒株生长特性、致病性以及免疫保护效果进行测定，证实了ORF7b基因的缺失不影响病毒增殖，但使得毒株失去了致病性；同时免疫保护实验结果显示，采用皮下免疫接种减毒病毒，免疫组中80％的猫在暴露于强毒株后一个月仍然存活，证实了该减毒病毒对猫传染性腹膜炎强毒株有理想的保护效果，提高了临床应用价值。