一种酪蛋白胨的制备方法，步骤包括：（1）碱性蛋白酶水解：配制酪蛋白溶液，以氨水调节pH加热溶解，然后以碱性蛋白酶进行水解；（2）点酸过滤：水解液调节pH至4.0~4.4进行点酸沉淀，然后加硅藻土进行过滤除杂，既得澄清水解液；（3）喷雾干燥制粉：将过滤后的酪蛋白水解液以碱液调节pH至7.0~7.5后喷雾干燥，收集得酪蛋白胨粉末。本发明以碱性蛋白酶水解酪蛋白，试验条件温和，试验过程可控，硅藻土过滤除杂效果良好，制得蛋白胨产品外观较好，理化指标合格，其中总氮含量13%，含量较高，作为微生物的氮源使用有利于微生物的繁殖，实现快速的增值和复壮。