本发明属于检测技术领域，具体涉及一种基于消除基质效应检测百草油中马兜铃酸的方法。本发明通过选择合适的样品预处理方法，通过分析得到最优的色谱分离条件兼顾基质效应和回收率两方面因素，建立了基于多反应监测(MRM)的液质联用检测方法，同时快速筛查本品中是否含有马兜铃酸Ι、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲa、马兜铃酸Ⅳa和马兜铃内酰胺Ι等五种马兜铃酸类成分，并快速准确测定五成分的含量，为本品安全性研究提供了科学依据，也为其他含细辛中成药中马兜铃酸类成分的检测提供了技术参考。