本发明公开了一种普雷沃氏菌内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶突变体及其应用，本发明的改造方法通过组合突变设计出最佳突变体，对PtDAPDH的蛋白质进行改造，克服了之前野生型酶催化活性低的局限，最终得到最佳突变体T5(PtDAPDHN13E/S90R/P254A)，其催化半衰期和D‑对羟基苯甘氨酸产量分别为野生型的1.10倍和2.67倍，以L‑对羟基苯甘氨酸为底物，转化后0.1L摇瓶产量为3.2g/L，转化率为32％，高催化效率和生产强度，大大降低了之前的高菌体量以及昂贵的底物成本，为D‑对羟基苯甘氨酸的工业化生产奠定了基础。