本发明提供一种葡萄糖脱氢酶突变体，该葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示，该葡萄糖脱氢酶突变体通过将位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变成苯丙氨酸得到，既能提高底物专一性，又能保持良好的最大反应速率。本发明还提供一种葡萄糖脱氢酶突变体的制备方法，具体是将海枣曲霉中位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变得到。本发明还提供一种含上述葡萄糖脱氢酶突变体的组合物。本发明还公开了上述葡萄糖脱氢酶突变体在血糖检测中的应用。