本发明提供了一种D‑核糖‑5‑磷酸的制备方法，其包括使用核糖激酶，将D‑核糖和磷酸供体进行磷酸化反应制得所述D‑核糖‑5‑磷酸，所述核糖激酶的氨基酸序列如NCBI登录号为WP_054396858.1、CCX07771.1、WP_125988536.1和/或WP_160803741.1所示的D‑核糖激酶。还公开了一种酶组合物，其内容见下文。本发明的D‑核糖激酶稳定性和酶活高，利用其制备D‑核糖5‑磷酸具有工艺操作简单、适用于更高的底物浓度、转化率高、生产效率高的优点。