本发明提供一种植物源7‑酮基石胆酸的制备方法，包括以式I所示的3,7‑二酮‑5β‑胆甾烷‑24‑酸为原料，在3α还原酶和包含碱水的体系中反应生成如式II所述的7‑酮基石胆酸。本发明以植物源发酵产物BA经过一系列合成制备的3,7‑二酮‑5β‑胆甾烷‑24‑酸为起始物料，打通了植物源全合成路线，打破了动物源的垄断地位。本发明的起始原料来源广泛，无动物源遗传病毒携带的可能性。本发明使用3α还原酶，利用酶的高度专一性特性，选择性还原效果好，无3β羟基异构体存在，同时该工艺通过碱水和甘油/2‑甲基四氢呋喃体系反应，安全、环保，化合物II收率较高，纯度较好。