本发明提供了一种UHPLC‑MS/MS法测定补肺活血胶囊在体内血药浓度的方法，包括对照溶液的制备：取补骨脂苷、异补骨脂苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、补骨脂素、异补骨脂素、3‑羟基‑9，10‑二甲氧基紫檀烷、新补骨脂异黄酮分别溶解并定容；定容后混合并逐级稀释成系列浓度的混合对照溶液；测试样品的制备：取测试者血液制成血浆样品并加入内标溶液为测试样品；UHPLC‑MS/MS测定：利用超高效液相色谱和二级质谱对混合对照溶液和测试样品进行定性、定量测定。本发明筛选了补肺活血胶囊中45种活性物质的血药浓度，并筛选出其中8种可能与补肺活血胶囊临床治疗作用的发挥密切相关的成分。所采用的UHPLC‑MS/MS法能够快速、专属性强、重复性好的检测补肺活血胶囊的血药浓度，适应于补肺活血胶囊的药物动力学研究和临床试验。