本发明属于蛋白质多肽技术领域，具体涉及一种提取自核桃粕的弹性蛋白酶抑制肽及其制备方法与应用。所述抑制肽自N端到C端的氨基酸序列为：Phe‑Phe‑Val‑Pro‑Phe(FFVPF)或Asn‑Ser‑Leu‑Asn‑Leu‑Pro‑Ile‑Leu(NSLNLPIL)。FFVPF对弹性蛋白酶的的半抑制浓度(IC50)达到0.469±0.010mg/mL，且具有经过胃消化后部分分解，在肠道内全部分解的特性；NSLNLPIL对弹性蛋白酶的的半抑制浓度(IC50)达到0.635±0.030mg/mL。本发明提供的短肽酶抑制作用明显，且采用核桃粕为原料，生产成本低，经济效益高。本发明还制备了负载短肽的纳米颗粒，CS‑TPP对短肽的包封率可达94.58±0.23％，粒径在140nm至180nm之间，zeta电位为+33mV至+36mV，且具有较好的环境稳定性。