本发明公开了柑橘过敏原Cit s 3.01抗原表达纯化、多克隆抗体制备及应用，并具体公开了一种密码子优化的芸香科植物过敏原Cit s 3.01基因，其特征在于，包括SEQ ID NO:2所示的序列。本发明通过优化Cit s 3.01基因原核表达序列，基因合成，构建过敏原Cit s 3.01的原核表达体系，利用已表达纯化的rCit s 3.01蛋白制备兔多克隆抗体Anti‑Cit s 3.01，对诸如柑橘果皮、果肉中过敏原Cit s 3.01含量进行检测，并可以利用光密度值衡量Western blot印迹强弱的方法评价诸如柑橘果实可食用部分过敏原Cit s 3.01潜在的致敏性。