本发明提供一种连接多泛素基因的方法，提供了优化的泛素（ubiquitin、Ub）基因作为多泛素基因连接的基本单位，用于表达载体的构建，同时本方法利用泛素基因的3’端核苷酸序列的特殊性来设计特殊的平末端酶切位点，并通过平末端限制性核酸内切酶stuI的特殊性将泛素基因连接成一个串联基因。线性多泛素分子可作为细胞内修饰靶蛋白并参与免疫调节的蛋白因子，具有非常广阔的研究及应用前景。本发明中涉及的多泛素基因的连接方法能够快速制备出所需长度泛素的基因，具有工艺简单、安全无毒，成本低等优点。