本发明公开了一种丙酮酸生产强度提高的重组菌及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明通过在光滑球拟酵母菌株中定位表达线粒体丙酮酸载体蛋白于细胞膜上，加强丙酮酸出细胞的速率和缓解丙酮酸对糖酵解途径关键酶的反馈抑制作用，进而提高丙酮酸的产量和生产强度，通过基因工程技术，将来源于酿酒酵母的MPC1和信号肽序列Shrew1p定位整合到pY26表达载体上，构建酵母重组表达质粒pY26‑Shrew1p‑MPC1，并将其电转进受体菌TgU‑中获得一株一株高产丙酮酸的工程菌株TgU‑(pY26‑Shrew1p‑MPC1)，相对于对照菌株TgU‑(pY26)，工程菌TgU‑(pY26‑Shrew1p‑MPC1)的细胞干重、葡萄糖消耗速率、丙酮酸的产量和丙酮酸生产强度相对于对照菌(TgU‑(pY26))分别提高了58.3％、68.1％、154.4％和152.6％。