本发明提供一种具有生物活性的高纯度胶原蛋白海绵及其制备方法，通过将动物跟腱采用特殊的酶解、自组装、凝胶层析、透析等纯化过程制得纯度大于99%的高纯度胶原蛋白，再通过特殊的冷冻干燥程序制备出的胶原蛋白海绵。本发明提供的一种具有生物活性的高纯度胶原蛋白海绵及其制备方法，制备的胶原蛋白海绵具有完整的二次自组装三螺旋结构，表面平整细腻，质地柔软，可用于自然腔道填充，可用于创面快速止血，可有效快速止血，防止创面血液渗出，低免疫原性，使胶原蛋白海绵的安全性得到更好的保障。