本发明提供一种用于5′RACE的高效RNA接头序列，所述接头序列如Seq ID No.1所示。本发明还提供含有所述接头序列的用于扩增miRNA剪切后的靶基因cDNA 5′末端的试剂盒。本发明通过对市场上5′RACE的RNA接头序列进行优化，使其引物很大程度减少了二聚体和发夹结构的可能性，可以更高灵敏度、更高特异性的扩增miRNA剪切后的靶基因cDNA5′末端序列，从而高效地验证miRNA靶基因的断裂位点，与市场上同类试剂盒产品相比，成本更低，灵敏性更高，准确性更强。