本发明公开了一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述抗干扰单组份酶底物显色试剂的PH值为4.0-6.0。本发明通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4.0-6.0，使抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景；且单组份的显色液避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的步骤，减少了操作时间，提高了效率，避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底物显色试剂的灵敏度。