一种降低重组人粒细胞刺激因子原液相关蛋白含量的工艺方法

    公开(公告)号:CN118063587A

    公开(公告)日:2024-05-24

    申请号:CN202410457997.7

    申请日:2024-04-17

    摘要: 本发明属于生物制药技术领域,具体涉及一种降低重组人粒细胞刺激因子原液相关蛋白含量的工艺方法,包括以下步骤:包涵体制取与溶解、粗提、复性、阴离子交换、阳离子交换、原液过滤除菌。相比于现有技术,本发明通过采用强阳柱SP HP离子交换柱在阳离子交换工序中对目的蛋白进行分离,不仅分离效果显著且提高了制品相关蛋白的去除效率;本发明复性工艺过程中,采用透析液一和还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比例为1:3的透析液二、透析液三,分步对产品进行透析复性,使目的蛋白正确折叠的概率更高、更接近天然构象、更稳定,更不易发生聚集、断裂或氨基酸修饰,减少了制品相关蛋白的形成,产品更加安全可靠,更适合药品生产的要求。

    一种大肠杆菌表达物的纯化方法
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116410295A

    公开(公告)日:2023-07-11

    申请号:CN202111649587.5

    申请日:2021-12-30

    摘要: 本发明公开了一种大肠杆菌表达物的纯化方法,包括:将大肠杆菌表达物样品进行阳离子层析,以便得到第一层析液,其中,阳离子层析采用pH 4.0的缓冲液平衡、冲洗层析柱;将第一层析液进行阴离子层析,以便得到第二层析液;将第二层析液进行过滤处理,以便得到过滤液;将过滤液进行超滤浓缩处理,以便得到纯化后的表达物。将大肠杆菌表达的G‑CSF蛋白,经过本纯化工艺,能够制备出纯度较高的蛋白产品,且工艺较为简单,可以实现放大,节约成本。

    重组人粒细胞集落刺激因子的高压定点聚乙二醇修饰方法

    公开(公告)号:CN115677844A

    公开(公告)日:2023-02-03

    申请号:CN202211456278.0

    申请日:2022-11-21

    发明人: 王祺

    摘要: 本发明提供重组人粒细胞集落刺激因子的高压定点聚乙二醇修饰方法,通过对rhG‑CSF和马来酰亚胺聚乙二醇修饰试剂的混合溶液在0.1‑600MPa压力下反应6‑24h;对修饰后的产物进行分离纯化并进行结构和活性验证。本发明方法能提高rhG‑CSF修饰反应效率,使用mPEG‑40kDa‑MAL和mPEG‑20kDa‑MAL定点修饰rhG‑CSF时分别能够提升蛋白单修饰率达到32%和45%,而常压下几乎不发生修饰反应,还能够减弱常规修饰反应参数的影响,提升生产效率,降低生产成本,适用于大规模工业生产。

    一种促进骨髓间充质干细胞分泌细胞因子的方法

    公开(公告)号:CN113512573A

    公开(公告)日:2021-10-19

    申请号:CN202110663784.6

    申请日:2021-06-16

    发明人: 余明友 余里

    摘要: 本发明公开了一种促进骨髓间充质干细胞分泌细胞因子的方法,包括以下步骤:(1)分离骨髓间充质干细胞进行原代培养,在细胞融合度达到80‑90%后,用0.25%胰酶消化;(2)将步骤(1)消化后的细胞用培养基重悬后接种至用羟丙基纤维素和泊洛沙姆188包被的培养瓶中,培养24h后进行半量换液,继续培养过程中每天补充一次培养基,每次补充的培养基中添加丹皮酚、金属硫蛋白‑3、雷帕霉素,连续培养3天,收集培养液。本发明对经原代培养后的细胞采用羟丙基纤维素和泊洛沙姆188包被的培养瓶培养,培养过程中及时补充添加丹皮酚、金属硫蛋白锌、雷帕霉素的培养基,显著的促进骨髓间充质干细胞分泌细胞因子,有利于骨髓间充质干细胞因子的收集和应用。

    一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法

    公开(公告)号:CN107188952B

    公开(公告)日:2020-07-28

    申请号:CN201710343246.2

    申请日:2017-05-16

    IPC分类号: C07K14/535 C07K1/18 C07K1/107

    摘要: 本发明提供一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法。具体而言,本发明选用阳离子层析柱纯化含有重组人粒细胞集落刺激因子(rhG‑CSF)的复性液,再进行适当的缓冲液置换制备获得高纯度的rhG‑CSF原液,其中所述阳离子层析柱中填料为混合模式的阳离子型。本发明纯化工艺简化了工艺路线,节省了生产时间,并且蛋白回收率高,所获得的蛋白原液纯度高,加入适当的药用辅料即可制备成药物制剂,十分适合大规模工业化放大生产。同时本发明还提供一种制备聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的方法。

    用于卵母细胞体外成熟的组合物和方法

    公开(公告)号:CN110312789A

    公开(公告)日:2019-10-08

    申请号:CN201780086105.5

    申请日:2017-12-08

    IPC分类号: C12N5/075 C07K14/535

    摘要: 本发明涉及用于卵母细胞的培养基及其用途。具体地,公开了用于体外培养卵母细胞的培养基,其中所述培养基包含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。培养基中GM-CSF的存在提高了卵母细胞的成熟和/或发育能力,使其适合用于随后的辅助生殖技术。还公开了提高卵母细胞的成熟和/或发育能力的方法。