公开(公告)号：CN110093394B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN201910390559.2

申请日：2019-05-10

申请人： 重庆科润生物医药研发有限公司

发明人： 李树刚 ,  张伟 ,  王传胜 ,  邓永康 ,  龚会英 ,  柴新娟 ,  但国平 ,  程丹凝 ,  余英鹏

IPC分类号： C12P21/06 ,  C07K14/48 ,  C07K1/113 ,  C07K1/16

摘要： 本发明涉及一种蛋白包涵体及重组人β‑神经生长因子的制备方法，对含肠激酶酶切位点的重组人β‑神经生长因子前体蛋白的包涵体进行色谱复性，得到复性前体蛋白，即蛋白包涵体；对复性前体蛋白进行肠激酶酶切，得到酶解产物；对酶解产物进行分离纯化。本发明将色谱法应用到rhpro‑NGF包涵体复性中，相比于传统的稀释复性方法，显著提高复性率，缩短复性时间，使后续纯化更简单，获得结构正确高纯度产品，能够减少蛋白质互相聚集的机会，打破复性变性反应平衡，使复性反应持续进行，以较高的蛋白复性浓度进行，便于去除变性剂，集成复性与纯化过程，可以实现自动化、规模化，层析介质可以重复使用，降低工艺成本，更利于将来产业化的大规模生产。

公开(公告)号：CN110093394A

公开(公告)日：2019-08-06

申请号：CN201910390559.2

申请日：2019-05-10

申请人： 重庆科润生物医药研发有限公司

发明人： 李树刚 ,  张伟 ,  王传胜 ,  邓永康 ,  龚会英 ,  柴新娟 ,  但国平 ,  程丹凝 ,  余英鹏

IPC分类号： C12P21/06 ,  C07K14/48 ,  C07K1/113 ,  C07K1/16

摘要： 本发明涉及一种蛋白包涵体及重组人β-神经生长因子的制备方法，对含肠激酶酶切位点的重组人β-神经生长因子前体蛋白的包涵体进行色谱复性，得到复性前体蛋白，即蛋白包涵体；对复性前体蛋白进行肠激酶酶切，得到酶解产物；对酶解产物进行分离纯化。本发明将色谱法应用到rhpro-NGF包涵体复性中，相比于传统的稀释复性方法，显著提高复性率，缩短复性时间，使后续纯化更简单，获得结构正确高纯度产品，能够减少蛋白质互相聚集的机会，打破复性变性反应平衡，使复性反应持续进行，以较高的蛋白复性浓度进行，便于去除变性剂，集成复性与纯化过程，可以实现自动化、规模化，层析介质可以重复使用，降低工艺成本，更利于将来产业化的大规模生产。