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公开(公告)号：CN114392361B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202210076725.3
申请日：2022-01-23
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
Abstract: 本发明提供了一种羧甲基壳聚糖‑腺病毒混合物，羧甲基壳聚糖在混合物中的浓度范围为1.25%‑2.5%（%：g/100ml in PBS），该混合物用于制备体内基因转导载体，可延长腺病毒介导外源基因表达时间，减轻急慢性免疫反应，在基于腺病毒作为体内靶向基因转导系统的基因表达、疾病模型研究、基因治疗、疫苗研发等基础及临床转化研究领域具有广阔的应用前景。本发明提供了一种羧甲基壳聚糖‑腺病毒混合物制备肝纤维化治疗药物中的应用，通过肝内注射混合物，羧甲基壳聚糖包裹腺病毒Ad‑IL10可有效控制IL‑10的释放和产生，从而缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化，为肝纤维化等慢性肝疾病的靶向基因治疗提供了重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN113999896A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111401991.0
申请日：2021-11-23
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种通用发夹引物，发夹结构的3’端连接有2‑6个碱基的随机序列，可有效结合各种DNA或RNA模板。本发明还提供了一种检测microRNA的方法，将通用发夹引物或者通用发夹引物组合物，作为microRNA特异性发夹引物的替代物，结合microRNA模板，启动逆转录反应，获得的cDNA模板由microRNA特异性正向引物和与部分茎环序列相同的通用反向引物扩增待测microRNA。本发明避免了针对待检测microRNA需要设计特异性发夹引物的问题，检测范围大，检测效率高，对于密切相关的microRNA家族成员的检测也具有高灵敏度和特异性；本发明简单方便，大大降低了引物设计成本，缩短了检测周期，并且节省RNA模板，通量高，适合各实验室推广应用。
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公开(公告)号：CN104450620A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410252305.1
申请日：2014-06-09
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12N5/10 , C12N15/867
Abstract: 本发明提供了一种可回复永生化肝细胞株的构建方法，从胚胎期12.5～14.5d天的小鼠肝脏中分离肝脏祖细胞，导入含有SV40T基因和HSV-TK基因的逆转录病毒，筛选具有肝祖细胞标志及向成熟肝细胞分化功能的单克隆细胞株，再导入含有CD基因的逆转录病毒获得携带双自杀基因的可回复永生化小鼠肝祖细胞。该细胞株能够在体外不断增殖又具有正常的肝细胞表型及功能，通过位点重组和药物筛选等可控性方式实现了永生化细胞安全性的可调控，而且最大限度的保证了该细胞在体内应用的生物安全性，减少永生化肝细胞应用于体内的危险性，为生物人工肝技术提供一种可靠、安全、理想的肝细胞材料。
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公开(公告)号：CN101812429A
公开(公告)日：2010-08-25
申请号：CN200910191280.8
申请日：2009-10-30
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
Abstract: 本发明公开了一种小鼠心肌祖细胞及其制备方法，该心肌祖细胞表达心肌祖细胞标志物ISL1及心肌细胞系早期标志物Tbx5；其制备方法是先分离培养胚胎15.5天的小鼠心肌细胞，使其感染永生化质粒SSR#69而永生化，通过抗生素筛选法和无限稀释法获得永生化的单克隆心肌细胞，再从中筛选出表达ISL1和Tbx5的心肌细胞，即得；该心肌祖细胞为可回复性永生化细胞，既能无限增殖，又无致瘤和引起病毒感染的危险，是研究影响心肌祖细胞在成体心肌细胞受损情况下增殖和分化因素的理想工具，有着良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118325841A
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202410475910.9
申请日：2024-04-19
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12N5/10 , C12N15/53 , C12N15/63 , C12N7/01 , C12N15/861
Abstract: 本发明提供了一种稳定过表达人GAPDH基因的293G或293GP细胞株及其制备方法，用于高效包装和扩增腺病毒。本发明还提供了一种腺病毒系统和腺病毒制备方法，转染293G细胞7天或293GP细胞5天即可完成病毒包装过程，包装时间短，病毒包装效率高，获得的腺病毒滴度高，对目的细胞感染效果更好。腺病毒在293G细胞或293GP细胞中的扩增效率显著高于亲代细胞。其中GAPDH和Ad5 pTP双过表达的293GP细胞是重组腺病毒生产系统中最有效的腺病毒包装细胞和扩增细胞，在腺病毒的制备和纯化工艺中具有很好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114752626A
公开(公告)日：2022-07-15
申请号：CN202210261569.8
申请日：2022-03-16
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12N15/867 , C12N15/65 , C12N15/37 , C12N5/10 , C12N15/861 , C12N15/12
Abstract: 本发明属于细胞工程技术领域，具体公开了一种可逆性永生化Ⅱ型肺泡上皮细胞及其构建与应用。本发明通过SSR#41永生化工具质粒和逆转录病毒系统构建了可逆性永生化肺泡细胞株imPACs，并进一步分选出了可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，为了解Ⅱ型肺泡细胞的功能和作用机制，以及肺相关疾病诊断及治疗的研究提供了更好的细胞模型。进一步地，本发明通过体内外腺病毒Ad‑TGF‑β1干预imPAC2细胞株，以及构建稳定低表达β‑Catenin的imPAC2细胞系(imPAC2‑Si‑β‑Catenin)，还构建了pSEBI‑Kras和pSEBI‑p53R273H稳定过表达Kras及R273H位点突变p53的imPAC2细胞系(imPAC2‑KrasmP53)，为肺纤维化、肿瘤等相关研究提供了良好的细胞工具。
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公开(公告)号：CN119464216A
公开(公告)日：2025-02-18
申请号：CN202411521017.1
申请日：2024-10-29
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
Abstract: 本发明提供了一种椎间盘再生模型，成功构建了hTERT可逆永生化的人髓核细胞（iHNPCs）和人纤维环细胞（iHAFCs），并基于这两种细胞，在经过成软骨分化因子和成骨因子的刺激后，分别将iHAFCs/PPCNg混合物及iHNPCs/GelMA水凝胶混合物加载到POC支架的3D椎间盘样结构的外周和中心区域，植入裸鼠皮下42天后，椎间盘模型的中央区域存在类似软骨的组织，而外围区域存在成熟的骨组织。本发明的椎间盘再生模型模拟了天然椎间盘的结构，为IVD的组织工程提供了重要的生物医学工程材料，在椎间盘退行性疾病中具有潜在的应用价值，也为研究椎间盘细胞功能和开发有效IVD组织工程方法提供了重要的手段。
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公开(公告)号：CN113999896B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202111401991.0
申请日：2021-11-23
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种通用发夹引物，发夹结构的3’端连接有2‑6个碱基的随机序列，可有效结合各种DNA或RNA模板。本发明还提供了一种检测microRNA的方法，将通用发夹引物或者通用发夹引物组合物，作为microRNA特异性发夹引物的替代物，结合microRNA模板，启动逆转录反应，获得的cDNA模板由microRNA特异性正向引物和与部分茎环序列相同的通用反向引物扩增待测microRNA。本发明避免了针对待检测microRNA需要设计特异性发夹引物的问题，检测范围大，检测效率高，对于密切相关的microRNA家族成员的检测也具有高灵敏度和特异性；本发明简单方便，大大降低了引物设计成本，缩短了检测周期，并且节省RNA模板，通量高，适合各实验室推广应用。
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公开(公告)号：CN114085871A
公开(公告)日：2022-02-25
申请号：CN202111471784.2
申请日：2021-12-02
Applicant: 重庆医科大学附属儿童医院
IPC: C12N15/861 , C12N7/00
Abstract: 本发明提供了一种腺病毒质粒载体及腺病毒的制备方法，设计含有腺病毒质粒载体中20 bp的位点序列1和位点序列2的上下游引物，扩增获得目的基因片段，酶切获得末端具有同源序列的腺病毒质粒载体，通过Gibson DNA反应将目的基因组装入载体，载体中含有ccdB基因，极大地减少了重组子的筛选工作量，重组有效率95%以上，随后在包装细胞中制备腺病毒，减化了构建腺病毒的步骤，出毒成功率80%以上，病毒滴度大于1012 pfu/ml，并且保证了重组腺病毒基因组的完整性，腺病毒运载目的基因可在细胞内有效表达具有正常生物学活性的目的蛋白。本发明优化了腺病毒制备方法，在基于腺病毒的基因表达、疾病模型研究、基因治疗、疫苗研发等基础及临床转化研究领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102736043B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210176008.4
申请日：2012-05-31
IPC: G01R33/381 , A61M31/00
Abstract: 本发明公开了一种能形成锥形圆顶状梯度磁场的方法和磁体结构，方法包括：步骤1：将一方形的永磁体作为主磁体，将两个高度低于该主磁体的方形永磁体作为辅磁体，所述辅磁体设置在该主磁体的两侧，主磁体与所述第一辅磁体、第二辅磁体的磁矩方向相同；步骤2：在两个辅磁体的顶面上分别设置一个楔形铁磁块，设置时，将楔形铁磁块的倾斜面朝上，其中一个方形面贴近于辅磁体顶面，另一个方形面贴近主磁体侧面，从而两个楔形铁磁块以“八”字状对称分布于主磁体的两侧，在主磁体的顶部形成锥形圆顶状梯度磁场，本发明的磁体结构可以作为磁性药物靶向引导磁体使用，紧凑的磁场及磁场梯度的分布可以在更小的空间范围上对磁性药物微粒进行控制，提高了靶向治疗的定位准确性。
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