公开(公告)号：CN110804621A

公开(公告)日：2020-02-18

申请号：CN201911054070.4

申请日：2019-10-31

Applicant: 郑州大学

Inventor： 翁海波 ,  崔晨阳 ,  郭婷婷 ,  张帅 ,  程家琪 ,  杨明研 ,  王婉佳

IPC: C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K9/50 ,  A61K47/46 ,  A61K31/7105 ,  A61K48/00 ,  A61P35/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本申请属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法。制备外囊泡时，具体包括：设计引物及PCR扩增、酶切、连接、转化、筛选和鉴定、重组载体的自连、连接目的miRNA、诱导目的miRNA表达和提取Evs等步骤。本申请以Lys-tRNA的序列和pET-31b(+)载体序列为基础，以特定miRNA为例，通过利用tRNA、rRNA的支架保护作用，重组构建了相关表达载体。初步实验结果表明，改造细菌较好实现了内源性、高效、大量表达功能性的miRNA的目的，同时较好实现了包含有miRNA的大肠杆菌Evs的高效收集，较好实现了以Evs作为miRNA载体的技术目标。