公开(公告)号：CN113865951A

公开(公告)日：2021-12-31

申请号：CN202110954211.9

申请日：2021-08-19

Applicant: 贵州大学

Inventor： 田雨风 ,  徐刚 ,  丁贵杰

IPC: G01N1/28 ,  G01N1/30 ,  G01N21/84

Abstract: 本发明公开了一种马尾松愈伤组织染色体制片方法，包括以下步骤：S1、培育马尾松愈伤组织，转接后3天在早上8：00~9：00取生长旺盛部分，作为愈伤组织样本。S2、将取好得愈伤组织样本置于0.15%的秋水仙素中进行6~8h预处理，置于25℃避光条件下；S3、经过预处理的愈伤组织，用蒸馏水冲洗5~6次后，投入到固定液中固定20h，其中固定时温度为4℃，固定液有比例3：1的乙醇与冰醋酸组成；S4、取出愈伤组织，分别在95%与85%的酒精中各30min，最后将材料存放于70%的酒精中；S5、取出愈伤组织，用蒸馏水冲洗30min，在预热60℃的1mol/L的盐酸中恒温解离8~10min，去除盐酸并水洗30min备用。通过核型分析确定染色体倍性，可对倍性育种等提供关键技术，本方法简便易行，成本低。

公开(公告)号：CN113711913A

公开(公告)日：2021-11-30

申请号：CN202110955086.3

申请日：2021-08-19

Applicant: 贵州大学

Inventor： 田雨风 ,  徐刚 ,  丁贵杰

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种马尾松胚乳二倍体愈伤组织诱导与增殖的方法，包括以下步骤：1）取成熟马尾松种子去壳后于4℃冰箱过夜；2）使用消毒剂对去壳马尾松种子进行一定时间的消毒处理和灭菌；3）配置愈伤组织诱导培养基，于高压灭菌锅灭菌；4）将消毒处理后的种子置于灭菌后培养皿，用滤纸吸干水分，纵切种子取出中间种胚，之后将胚乳接种于愈伤诱导培养基中进行暗培养；5）一个月后将胚乳愈伤组织转接继代，并转入光环境下培养；6）鉴定胚乳细胞染色体倍性；7）对二倍体愈伤组织进行增殖培养。本方法设计理想，通过对马尾松胚乳（单倍体）进行组织培养，诱导和增殖胚乳二倍体愈伤组织，为马尾松双单倍体植株培育与马尾松倍性育种奠定了基础。