公开(公告)号：CN113999936A

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202111249403.6

申请日：2021-10-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张东 ,  马小燕 ,  王敏瑞 ,  鲍俊华 ,  李金伟 ,  程曦 ,  马娟娟

IPC: C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明属于病毒检测技术领域，公开了一种基于RT‑RPA‑LFD技术快速检测苹果茎沟病毒的方法，包括：材料采集、RNA提取与cDNA的反转录合成；引物设计；重组酶聚合酶扩增和侧流层析试纸条检测。本发明将反转录和重组酶聚合酶扩增结合，建立并优化了RT‑RPA反应条件，综合琼脂糖凝胶电泳和侧流层析试纸条的分析结果，选择最适反应条件，RPA反应扩增目的条带大小为267bp，琼脂糖凝胶电泳结果显示RPA反应获得了预期目的产物。本发明利用一种简单、廉价且快速的RNA提取方法，直接从苹果叶片上粗提取RNA检测苹果ASGV，结果显示所检样品的RT‑PCR和一步法RT‑RPA的检测结果一致。