公开(公告)号：CN110512008A

公开(公告)日：2019-11-29

申请号：CN201910539501.X

申请日：2019-06-20

Applicant: 苏州大学

Inventor： 孙万平 ,  陶静 ,  刘婉婉 ,  丁威

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/14 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42 ,  C12R1/19 ,  C12R1/63 ,  C12R1/445 ,  C12R1/085 ,  C12R1/01 ,  C12R1/145

Abstract: 本发明公开了十一种食源性致病菌检测用公共引物介导的PCR试剂盒及其应用；利用公共引物介导的多重PCR技术，以11种常见食源性致病菌（沙门氏菌、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌、肠出血性大肠埃希菌O157、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、A型肉毒梭菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌）的特异性基因作为检测标，建立一种高效、高特异性、高通量的多重PCR检测体系，研发适用于常见食源性致病菌检测的核酸检测试剂盒。公共引物敏感性达到103copies/μL，构建的同时检测11种食源性致病菌的UP-M-PCR体系，通过单模板和二模板实验验证UP-M-PCR体系具有良好的特异性，细菌基因组DNA检测体系敏感性高至0.01ng/μL。

公开(公告)号：CN112575061A

公开(公告)日：2021-03-30

申请号：CN202011570847.5

申请日：2020-12-26

Applicant: 苏州大学

Inventor： 夏水秀 ,  方坛芬 ,  丁威 ,  韩蓉 ,  薛满 ,  孙万平

IPC: C12Q1/6806

Abstract: 本发明属于核酸提取技术领域，具体为一种快速一步法提取组织DNA的方法，将组织加入快速一步法核酸提取试剂中，静置，完成组织DNA的提取；所述快速一步法核酸提取试剂包括下述原料：氢氧化钠（NaOH）、乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)、醋酸钾（KAc）。采用本发明的提取方法，组织只需与试剂静置2~6min，无须多步反应和实验设备，所提取的组织DNA浓度与纯度均较好；静置2‑6分重点的5个不同时间点的上清，稀释10倍作为PCR扩增模板时，扩增产物电泳条带均较清晰。因此，本发明方法对组织进行现场核酸的即时检验（point‑of‑care testing，POCT）具有极其重要的意义。

公开(公告)号：CN113881757A

公开(公告)日：2022-01-04

申请号：CN202111223613.8

申请日：2021-10-20

Applicant: 苏州大学

Inventor： 孙万平 ,  丁威 ,  王波 ,  方坛芬 ,  刘岩

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明属于分子诊断领域，具体为一种基于CRISPR体系检测羊肉源基因的方法，本发明公开了一条羊的cr RNA，采用了RPA前置扩增与CRISPR/Cas12a体系两个步骤对羊肉源基因进行检测，具体为在扩增完成后，将扩增子加入CRISPR体系，由Cas12a‑cr RNA识别靶标并激活其反式切割活性，从而切断体系中的ss DNA荧光猝灭探针发出荧光指示信号，本发明能够将羊肉源基因特异性区分于牛，猪，鸡，鸭，驴，马，鼠，狐，兔，狗这10种肉类，在不依赖仪器的情况下，灵敏度达到10 pg/ul，而且检测时间仅需1h。

公开(公告)号：CN110512008B

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN201910539501.X

申请日：2019-06-20

Applicant: 苏州大学

Inventor： 孙万平 ,  陶静 ,  刘婉婉 ,  丁威

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/14 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42 ,  C12R1/19 ,  C12R1/63 ,  C12R1/445 ,  C12R1/085 ,  C12R1/01 ,  C12R1/145

Abstract: 本发明公开了十一种食源性致病菌检测用公共引物介导的PCR试剂盒及其应用；利用公共引物介导的多重PCR技术，以11种常见食源性致病菌（沙门氏菌、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌、肠出血性大肠埃希菌O157、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、A型肉毒梭菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌）的特异性基因作为检测标，建立一种高效、高特异性、高通量的多重PCR检测体系，研发适用于常见食源性致病菌检测的核酸检测试剂盒。公共引物敏感性达到103copies/μL，构建的同时检测11种食源性致病菌的UP‑M‑PCR体系，通过单模板和二模板实验验证UP‑M‑PCR体系具有良好的特异性，细菌基因组DNA检测体系敏感性高至0.01ng/μL。

公开(公告)号：CN113817843A

公开(公告)日：2021-12-21

申请号：CN202111222440.8

申请日：2021-10-20

Applicant: 苏州大学

Inventor： 孙万平 ,  丁威 ,  张玲 ,  方坛芬 ,  刘岩

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于核酸检测领域，具体为一对能够同时扩增牛，羊，猪，鸡，鸭，驴，马，鼠，狐，兔，狗的11种肉源基因的通用引物，能够用于PCR和RPA的扩增，且扩增子具有良好的特异性。该引物能够在扩增完成后进行sanger测序，用于肉源鉴定。也可以在扩增后结合CRISPR/Cas12a体系，利用体系的反式切割活性以荧光指示信号，用于肉类掺假的检测。

公开(公告)号：CN112760413A

公开(公告)日：2021-05-07

申请号：CN202110303536.0

申请日：2021-03-22

Applicant: 苏州大学

Inventor： 孙万平 ,  张玲 ,  钱利祥 ,  丁威 ,  方坛芬 ,  韩蓉

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了公共引物介导的多重定量PCR检测技术在转基因大豆检测中的应用，具体检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆。在每对特异性引物的5’,端均加上一段公共引物,形成特异性嵌合引物。多重PCR检测体系扩增出特异性片段，GeXP检出各转基因大豆片段长度，GeXP多重检测体系检测敏感性可达到为1 ng/µL;扩增产物测序结果进一步说明了引物扩增的特异性。本发明建立的基于GeXP系统的多重PCR定量检测技术,可以准确鉴别6种转基因大豆,为转基因大豆及其他转基因产品提供了新型的检测方法。