公开(公告)号：CN114457142A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202210176147.0

申请日：2022-02-25

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林文忠 ,  许瑜婷 ,  黄婉婷 ,  杜振国 ,  高芳銮 ,  吴祖建

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/70 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明提供一种高效加尾快速扩增植物dsRNA病毒基因组末端序列的方法及其应用。该方法通过加热总RNA变性成单链RNA；对单链RNA的3'端加A尾；使用oligo(dT)10‑RT将RNA逆转录成cDNA；以cDNA为模板将病毒基因组各分段的两端划分为5'端区域和3'端区域进行Multiplex PCR；跑胶回收目的条带并将其连接至克隆载体后进行测序，获得基因组的全部末端序列。该方法对样品的RNA质量要求低，oligo(dT)10‑RT与Anchor24‑F引物在dsRNA病毒基因组末端序列鉴定上可通同，适用于批量获得dsRNA病毒基因组末端序列，将有助于未知的dsRNA基因组全长序列的获得。

公开(公告)号：CN111808992A

公开(公告)日：2020-10-23

申请号：CN202010681921.4

申请日：2020-07-15

Applicant: 福建农林大学 ,  福州海关技术中心

Inventor： 高芳銮 ,  沈建国 ,  蔡伟 ,  杨宏凯 ,  陈细红 ,  杨晶文

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供辣椒脉斑驳病毒多基因联合检测鉴定方法，属于植物病毒检测领域，其采用了两个引物对CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R，建立基于ChiVMV外壳蛋白（CP）与细胞质内含体（CI）两个基因的多基因联合检测体系。该方法不仅具有良好的特异性，而且灵敏度与单一RT-PCR的灵敏度相当，均为10-4数量级，显示出良好的检测灵敏度。本发明建立的多基因联合检测体系能在一个反应中同时检测出ChiVMV的CP及CI基因保守区片段，可以满足口岸进出境和农业生产上辣椒脉斑驳病毒的快速、准确检测需求。

公开(公告)号：CN114457142B

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202210176147.0

申请日：2022-02-25

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 林文忠 ,  许瑜婷 ,  黄婉婷 ,  杜振国 ,  高芳銮 ,  吴祖建

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/70 ,  C12R1/94

Abstract: 本发明提供一种高效加尾快速扩增植物dsRNA病毒基因组末端序列的方法及其应用。该方法通过加热总RNA变性成单链RNA；对单链RNA的3'端加A尾；使用oligo(dT)10‑RT将RNA逆转录成cDNA；以cDNA为模板将病毒基因组各分段的两端划分为5'端区域和3'端区域进行Multiplex PCR；跑胶回收目的条带并将其连接至克隆载体后进行测序，获得基因组的全部末端序列。该方法对样品的RNA质量要求低，oligo(dT)10‑RT与Anchor24‑F引物在dsRNA病毒基因组末端序列鉴定上可通同，适用于批量获得dsRNA病毒基因组末端序列，将有助于未知的dsRNA基因组全长序列的获得。