公开(公告)号：CN117925687A

公开(公告)日：2024-04-26

申请号：CN202311768367.3

申请日：2023-12-16

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 秦冠男 ,  曾任森 ,  宋圆圆 ,  蔡开明 ,  刘春梅

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/64 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明公开了一种组装TALE重复单元阵列的方法和植物TALEN载体试剂盒。其中，组装TALE重复单元阵列的方法步骤，具体包括：1、利用模板载体扩增出组装单元(含RVD模块)；2、通过无缝克隆技术将含RVD模块组装至供体载体骨架，得到包含TALE阵列的入门载体；3、通过位点特异性重组技术将入门载体携带的TALE阵列组装至目标载体骨架，得到具有TALE衍生蛋白表达盒的终载体。通过无缝克隆和位点特异性重组克隆技术的层级化、依次使用，本发明具备简单高效的优点。通过对包括TALE重复单元在内的DNA序列的差异性优化，降低了终载体的序列重复程度。与现有的TALE重复单元阵列的组装方法相比，本发明能够简单、高效地组装任意数量的TALE阵列，得到序列重复程度低的TALE相关载体，适宜进一步推广应用。

公开(公告)号：CN116254258A

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202310002275.8

申请日：2023-01-03

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 秦冠男 ,  曾任森 ,  宋圆圆 ,  刘春梅

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了一种通过短寡核苷酸构建含标签序列载体文库的方法及应用。该方法需两种寡核苷酸，即定制的标签引物和可用于所有文库构建的通用引物。标签引物的中间是标签信序列，两侧是退火序列。通用引物的两侧是与标签引物退火序列互补的序列，中间为可被寄主微生物识别为碱基损伤的修饰碱基。将标签引物文库与等量的通用引物通过退火，获取引物二聚体。引物二聚体两侧为碱基配对的DNA双链，且为粘性末端。引物二聚体的中间为不配对的Ω环结构，Ω环的双链分别含有标签引物所携带的标签信息和通用引物携带的修饰碱基。引物二聚体与线性化载体连接，再转化大肠杆菌，通过细胞内源的碱基切除修复机制将Ω环的修饰碱基所在区域替换为标签序列。