一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法

    公开(公告)号:CN105504002A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201610039619.2

    申请日:2016-01-21

    CPC classification number: C07K1/047

    Abstract: 本发明提供一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法,在自然光下,没有被噬菌体侵染的细菌不显蓝色,噬菌体侵染的细菌显蓝色;在加入致死条件诱导剂诱导下,具有抑制QS功能的特异多肽因抑制QS分子的活性而不启动自杀基因的表达,因此存活;而非特异多肽无法抑制QS分子,导致自杀基因启动致死;然后将存活的候选克隆挑出来,进一步功能验证,最后通过DNA测序的方法获得特异多肽序列对应的DNA序列,从而获得高效、特异的QSI多肽。本发明步骤简单,只需要3天至一周左右的时间,就可以获得多个QSI候选多肽,因此具有非常明显的优势。

    一种苏云金杆菌固态发酵培养基的制备方法

    公开(公告)号:CN102250818B

    公开(公告)日:2013-05-15

    申请号:CN201110207054.1

    申请日:2011-07-23

    Abstract: 一种苏云金杆菌固态发酵培养基的制备方法,包括菌糠干燥、菌糠粉碎和固态发酵培养基调配。本发明以生产食用菌后的废培养料菌糠为主要原料,废物利用,变废为宝,除添加了培养苏云金杆菌所必须的C和N等营养成份外,还针对提高苏云金杆菌的杀虫毒力而添加了K、Mg、Ca和Mn等成份,既保证了产品质量,而且大大降低了生产成本。经统计,采用本发明的培养基生产苏云金杆菌生物农药原粉的生产成本,仅相当于使用常规方法生产成本的一半。还解决了生产食用菌废菌棒污染环境的问题,经济效益、生态效益显著。

    一种苏云金杆菌固态发酵培养基的制备方法

    公开(公告)号:CN102250818A

    公开(公告)日:2011-11-23

    申请号:CN201110207054.1

    申请日:2011-07-23

    Abstract: 一种苏云金杆菌固态发酵培养基的制备方法,包括菌糠干燥、菌糠粉碎和固态发酵培养基调配。本发明以生产食用菌后的废培养料菌糠为主要原料,废物利用,变废为宝,除添加了培养苏云金杆菌所必须的C和N等营养成份外,还针对提高苏云金杆菌的杀虫毒力而添加了K、Mg、Ca和Mn等成份,既保证了产品质量,而且大大降低了生产成本。经统计,采用本发明的培养基生产苏云金杆菌生物农药原粉的生产成本,仅相当于使用常规方法生产成本的一半。还解决了生产食用菌废菌棒污染环境的问题,经济效益、生态效益显著。

    一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法

    公开(公告)号:CN105504002B

    公开(公告)日:2019-01-18

    申请号:CN201610039619.2

    申请日:2016-01-21

    Abstract: 本发明提供一种利用自杀基因快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法,在自然光下,没有被噬菌体侵染的细菌不显蓝色,噬菌体侵染的细菌显蓝色;在加入致死条件诱导剂诱导下,具有抑制QS功能的特异多肽因抑制QS分子的活性而不启动自杀基因的表达,因此存活;而非特异多肽无法抑制QS分子,导致自杀基因启动致死;然后将存活的候选克隆挑出来,进一步功能验证,最后通过DNA测序的方法获得特异多肽序列对应的DNA序列,从而获得高效、特异的QSI多肽。本发明步骤简单,只需要3天至一周左右的时间,就可以获得多个QSI候选多肽,因此具有非常明显的优势。

    一种筛选N-酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法

    公开(公告)号:CN105504000B

    公开(公告)日:2019-06-07

    申请号:CN201610039608.4

    申请日:2016-01-21

    Abstract: 本发明属于病原微生物预防与控制领域,具体涉及一种筛选N‑酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法,以QS分子C4‑AHL感应诱导抗性载体pSB538,带有嗜水气单胞菌群体感应系统ahyRI’和氯霉素抗性基因Cmr,AhyR蛋白感应C4‑AHL分子或者其模拟多肽时,激活AhyI’启动子,诱导抗性基因表达;在培养基中培养,只有添加C4‑AHL分子或者产生其模拟多肽才能使细胞存活;利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌到胞外的特性,侵染携带pSB538的大肠杆菌,在添加氯霉素抗性的平皿中筛选出孵育后在可见光下显蓝色的噬菌斑;然后将该噬菌体扩增,加入带有pSB536的QS感应菌株中,通过C4‑AHL模拟多肽可诱导生物发光的方法验证,最后测序获得特异模拟多肽序列。

    一种利用发光法快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法

    公开(公告)号:CN105504001A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201610039610.1

    申请日:2016-01-21

    CPC classification number: C07K1/047

    Abstract: 本发明提供一种利用发光法快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法,利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌到胞外的特性,侵染携带pSB536的大肠杆菌ER2738,然后在添加C4-AHL分子、四环素、氨苄青霉素、X-gal/IPTG的平皿中筛选出可见光下显蓝色、激发光下不发或者发弱生物荧光的细菌克隆;然后将该噬菌体扩增,添加上述物质的平板中划线培养,通过抑制生物发光的方法验证QSI功能,最后测序获得特异QSI多肽序列。本发明步骤简单,只需要3天至一周左右的时间,就可以获得多个QSI候选多肽,因此具有非常明显的优势。

    一种利用发光法快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法

    公开(公告)号:CN105504001B

    公开(公告)日:2019-07-09

    申请号:CN201610039610.1

    申请日:2016-01-21

    Abstract: 本发明提供一种利用发光法快速筛选细菌群体感应抑制剂的方法,利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌到胞外的特性,侵染携带pSB536的大肠杆菌ER2738,然后在添加C4‑AHL分子、四环素、氨苄青霉素、X‑gal/IPTG的平皿中筛选出可见光下显蓝色、激发光下不发或者发弱生物荧光的细菌克隆;然后将该噬菌体扩增,添加上述物质的平板中划线培养,通过抑制生物发光的方法验证QSI功能,最后测序获得特异QSI多肽序列。本发明步骤简单,只需要3天至一周左右的时间,就可以获得多个QSI候选多肽,因此具有非常明显的优势。

    一种筛选N-酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法

    公开(公告)号:CN105504000A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201610039608.4

    申请日:2016-01-21

    CPC classification number: C07K1/047

    Abstract: 本发明属于病原微生物预防与控制领域,具体涉及一种筛选N-酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法,以QS分子C4-AHL感应诱导抗性载体pSB538,带有嗜水气单胞菌群体感应系统ahyRI’和氯霉素抗性基因Cmr,AhyR蛋白感应C4-AHL分子或者其模拟多肽时,激活AhyI’启动子,诱导抗性基因表达;在培养基中培养,只有添加C4-AHL分子或者产生其模拟多肽才能使细胞存活;利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌到胞外的特性,侵染携带pSB538的大肠杆菌,在添加氯霉素抗性的平皿中筛选出孵育后在可见光下显蓝色的噬菌斑;然后将该噬菌体扩增,加入带有pSB536的QS感应菌株中,通过C4-AHL模拟多肽可诱导生物发光的方法验证,最后测序获得特异模拟多肽序列。

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