公开(公告)号：CN107253988B

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN201710592911.1

申请日：2017-07-19

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  夏菁潞 ,  孟春 ,  刘照 ,  罗岭 ,  俞博彤

IPC: C07K14/705 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡因子配体PD‑L2（hPD‑L2）蛋白的制备方法，属于重组蛋白的制备方法技术领域。本方法采用PCR技术对整个胞外区进行扩增，并与pET‑22b载体进行连接，构建融合表达重组质粒，转入原核表达系统RossetaTM(DE3)宿主菌诱导表达hPD‑L2蛋白，获得上清表达的hPD‑L2蛋白，然后利用Ni‑NTA柱亲和层析纯化，获得高纯度、高稳定性、构象均一的蛋白。本发明制备的hPD‑L2蛋白可作为抗原免疫Balb/c雌性小鼠，用于制备单克隆抗体。通过本发明制备的hPD‑L2蛋白具有流程简便、周期短、成本低、获得的蛋白纯度高与均一性高的特点。

公开(公告)号：CN107090042B

公开(公告)日：2019-03-12

申请号：CN201710278014.3

申请日：2017-04-25

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  孟春 ,  刘照 ,  罗岭 ,  夏菁潞 ,  徐淑丽

IPC: C07K16/28 ,  C12N5/20 ,  C12N15/13

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡因子配体hPD‑L2单克隆抗体及其制备方法，属于抗体的制备方法技术领域。所述抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述的重链可变区碱基和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示，轻链可变区的碱基和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑4所示。本发明的方法制备的hPD‑L2的单克隆抗体在免疫组化的结果上具有较强的膜定位和具有高特异性、敏感度高、纯度高的优点。

公开(公告)号：CN107090042A

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201710278014.3

申请日：2017-04-25

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  孟春 ,  刘照 ,  罗岭 ,  夏菁潞 ,  徐淑丽

IPC: C07K16/28 ,  C12N5/20 ,  C12N15/13

CPC classification number: C07K16/2827 ,  C07K2317/21 ,  C07K2317/56 ,  C07K2317/92

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡因子配体hPD‑L2单克隆抗体及其制备方法，属于抗体的制备方法技术领域。所述抗体包括轻链可变区和重链可变区，所述的重链可变区碱基和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示，轻链可变区的碱基和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑4所示。本发明的方法制备的hPD‑L2的单克隆抗体在免疫组化的结果上具有较强的膜定位和具有高特异性、敏感度高、纯度高的优点。

公开(公告)号：CN107253988A

公开(公告)日：2017-10-17

申请号：CN201710592911.1

申请日：2017-07-19

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  夏菁潞 ,  孟春 ,  刘照 ,  罗岭 ,  俞博彤

IPC: C07K14/705 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡因子配体PD‑L2（hPD‑L2）蛋白的制备方法，属于重组蛋白的制备方法技术领域。本方法采用PCR技术对整个胞外区进行扩增，并与pET‑22b载体进行连接，构建融合表达重组质粒，转入原核表达系统RossetaTM(DE3)宿主菌诱导表达hPD‑L2蛋白，获得上清表达的hPD‑L2蛋白，然后利用Ni‑NTA柱亲和层析纯化，获得高纯度、高稳定性、构象均一的蛋白。本发明制备的hPD‑L2蛋白可作为抗原免疫Balb/c雌性小鼠，用于制备单克隆抗体。通过本发明制备的hPD‑L2蛋白具有流程简便、周期短、成本低、获得的蛋白纯度高与均一性高的特点。

公开(公告)号：CN106749666A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611197005.3

申请日：2016-12-22

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  孟春 ,  吕唯 ,  刘照 ,  吴茂

IPC: C07K16/28 ,  C12N15/13 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02

CPC classification number: C07K16/2818 ,  C07K2317/56 ,  C07K2317/92

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡受体hPD‑1单克隆抗体的制备方法，属于抗体的制备方法技术领域。包括以下步骤：hPD‑1胞外段重组基因的构建；hPD‑1胞外段蛋白的制备；将制备好的抗原注射到Balb/c小鼠体内；再加强免疫3次后采血，ELISA检测血清效价；取效价达到要求的Balb/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合；杂交瘤细胞的克隆化培养；将克隆化培养、筛选获得的杂交瘤细胞接种于Balb/c小鼠腹腔内，即可获得抗体浓度很高的腹水单抗；利用Protein A填料纯化单克隆单体。本发明的方法制备的hPD‑1的单克隆抗体在免疫组化的结果上具有较强的膜定位和具有高特异性、敏感度高、纯度高的优点。

公开(公告)号：CN106749666B

公开(公告)日：2018-12-25

申请号：CN201611197005.3

申请日：2016-12-22

Applicant: 福州大学

Inventor： 杨娟娟 ,  孟春 ,  吕唯 ,  刘照 ,  吴茂

IPC: C07K16/28 ,  C12N15/13 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明涉及一种人源程序性死亡受体hPD‑1单克隆抗体的制备方法，属于抗体的制备方法技术领域。包括以下步骤：hPD‑1胞外段重组基因的构建；hPD‑1胞外段蛋白的制备；将制备好的抗原注射到Balb/c小鼠体内；再加强免疫3次后采血，ELISA检测血清效价；取效价达到要求的Balb/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合；杂交瘤细胞的克隆化培养；将克隆化培养、筛选获得的杂交瘤细胞接种于Balb/c小鼠腹腔内，即可获得抗体浓度很高的腹水单抗；利用Protein A填料纯化单克隆单体。本发明的方法制备的hPD‑1的单克隆抗体在免疫组化的结果上具有较强的膜定位和具有高特异性、敏感度高、纯度高的优点。